黑果腺肋花楸花色苷提取物对人视网膜色素上皮细胞的保护作用

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zzjokok
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黑果腺肋花楸,又名野樱莓、不老莓,富含原花青素,花色苷和类黄酮等多酚类物质。花色苷具有很强的抗氧化活性、抗癌、抗血栓、提高免疫力和促进视红素再合成等多种生物活性。近年来国内对其功能性研究增多,但食品开发加工方面仍处于起步阶段,远不及国外。本论文探究了黑果腺肋花楸中的花色苷的最佳提取工艺并鉴定了黑果腺肋花楸花色苷总量和种类。另外,探究黑果腺肋花楸花色苷的体外抗氧化能力,并研究其提取物对H202诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。为黑果腺肋花楸的功能性产品研发提供数据支持。试验方法与结论如下:1.基于单因素试验,进行四因素三水平的响应面试验,分析法优化超声辅助提取黑果腺肋花楸花色苷的工艺。结果表明,超声辅助提取黑果腺肋花楸花色苷的最优提取工艺如下:乙醇体积分数62%、超声功率195 W、液料比19:1(mL/g)、提取时间45 min。在该优化条件下进行验证性试验,测得黑果腺肋花楸花色苷含量为4.248 mg/g,与预测值相对误差约为1.56%。2.通过液-质联用对黑果腺肋花楸中花色苷成分进行鉴定分析。通过色谱图和质谱图,与参考文献进行比对验证,鉴定出黑果腺肋花楸中有5种花色苷,包括矢车菊素-3,5-二己糖苷,矢车菊素-3-半乳糖苷,矢车菊素-3-阿拉伯糖苷,矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-木糖苷。3.试验通过测定总抗氧化能力(T-AOC)和ABTS+·[2,2’-联氨-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基]、超氧阴离子(O2-·)自由基清除能力,以VC为阳性对照,分析黑果腺肋花楸花色苷与VC的抗氧化能力,结果表明,黑果腺肋花楸花色抗氧化能力优于VC。4.采用倒置相差显微镜观察凋亡的细胞形态特征,MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)水平,试剂盒法检测caspase-3活性以及流式细胞计法测定细胞凋亡。形态学观察及MTT细胞活力试验显示,黑果腺肋花楸提取物对H202诱导损伤的ARPE-19细胞具有较强的保护作用,细胞存活率由63.32%升至86.30%。黑果腺肋花楸提取物预处理可显著清除ARPE-19细胞内ROS和降低caspase-3水平,与此同时ARPE-19细胞的凋亡率从29.11%降低到8.85%,与H202处理比,极显著降低(P<0.01)。结论表明黑果腺肋花楸花色苷提取物保护由H202诱导损伤的ARPE-19细胞。
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