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[目的]通过观察粪肠球菌对17%EDTA冲洗液处理不同时间后根管壁牙本质的黏附量及对牙本质小管的侵入深度,研究17%EDTA冲洗液对粪肠球菌黏附于牙本质的影响,为临床合理使用EDTA根管冲洗液提供实验参考。[方法]将粪肠球菌标准株(ATCC19433)复苏培养,通过形态学分析进行细菌鉴定,测定细菌不同生长时期的OD值并绘制标准曲线,实验选用对数生长期的细菌。收集因正畸减数拔除的单根下颔前磨牙38例,截除牙冠,将牙根常规预备后纵向劈为两半。选取形态完好的样本共60例,将其中12例切割成5mm×5mm×1mm的牙本质片。将48例半劈牙样本及12例牙本质片样本随机分为A、B、C 3个实验组和1个对照组,每组含12例半劈牙样本及3例牙本质片样本,各组处理如下:A组,17%EDTA浸泡1min;B组,17%EDTA浸泡3min;C组,17%EDTA浸泡5min;对照组,0.9%生理盐水浸泡5min。每组随机抽取1个样本,扫描电镜观察牙本质小管开放情况。将粪肠球菌接种至装有牙本质样本的24孔板,每孔1个样本,孵育培养7d。扫描电镜观察牙本质表面粪肠球菌的黏附状态;激光共聚焦扫描电镜测量牙本质表面粪肠球菌生物膜厚度;组织学切片革兰染色及激光共聚焦扫描电镜分别测量粪肠球菌侵入牙本质小管的深度;菌落形成单位计数法计算粪肠球菌黏附量。[结果]1、经形态学分析鉴定粪肠球菌标准株(ATCC19433)为纯菌株,标准曲线显示4～12h为细菌对数生长期。2、扫描电镜观察3个实验组经17%EDTA处理后均有不同程度的牙本质小管开放,其中处理1min组开放数量最少,尚有许多不完全开放或封闭的牙本质小管;5min组开放数量最多,所有牙本质小管口清晰暴露;对照组几乎无牙本质小管口暴露。3、扫描电镜观察牙本质表面粪肠球菌黏附状态,各组牙本质表面均有细菌附着,其中17%EDTA处理1min组和对照组附着数量较少,细菌散在分布,未侵入牙本质小管;其次为3min组;5min组可见大量细菌黏附,聚集形成多层次的生物膜并覆盖牙本质小管口。4、组织学切片革兰染色后,光学显微镜下见各组牙本质小管均有不同程度的蓝染颗粒,各组细菌侵入深度比较,17%EDTA处理3min组、5min组的细菌侵入深度均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而1min组与对照组的侵入深度无明显差异(P>0.05);3个实验组之间比较,处理5min组的细菌侵入深度大于1min组和3min组,差异有统计学意义(P<0.05),而1min组和3min组的侵入深度无明显差异(P>0.05)。5、荧光染色后激光共聚焦扫描电镜下可见样本表面细菌生物膜红绿荧光相互夹杂,细菌呈弥散性分布,分别测量各组牙本质表面细菌生物膜厚度并比较,17%EDTA处理1min组、3min组、5min组的生物膜厚度均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3个实验组之间比较,处理1min组、3min组、5min组的生物膜厚度依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。6、激光共聚焦扫描电镜测量各组细菌侵入牙本质小管深度,结果显示,17%EDTA处理1min组、3min组、5min组的细菌侵入深度均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3个实验组之间比较,处理1min组、3min组、5min组的细菌侵入深度依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。7、菌落形成单位计数分析各组细菌在BHI平板上培养后形成的菌落数,结果显示,17%EDTA处理1min组、3min组、5min组的菌落数均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3个实验组之间比较,处理1min组、3min组、5min组的菌落数依次增加,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]17%EDTA根管冲洗液可促进粪肠球菌黏附于牙本质表面及侵入牙本质小管。当处理时间从1min延长至5min时,粪肠球菌对牙本质表面的黏附量及侵入牙本质小管的深度也随之增加。