本研究以苹果实生苗为试材,建立了其叶片不定芽的高效再生体系,并采用农杆菌介导法将LEAFY基因转入苹果杂交种中,以期获得含有LEAFY基因的苹果新种质,为苹果成花机理的研究打下基础。研究结果如下:1.研究了激素种类、浓度、暗处理时间以及叶片放置方式对苹果实生苗继代和叶片不定芽再生的影响,结果表明:70%乙醇处理10s+0.1%HgCl2溶液处理5min是苹果种子和茎段的最佳消毒方法,继代培养基MS+NAA0.1mg/L+BA0.5mg/L,生根培养基1/2MS+IBA1.0mg/L+7-14d暗处理,再生培养基MS+NAA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L+21d叶片暗处理,并且叶片远轴面接触培养基。叶片不定芽再生率达到100%2.应用农杆菌介导法,以苹果实生苗组培苗的叶片为受体材料,进行了不同选择压、农杆菌侵染时间、共培养时间、抑菌素浓度等遗传转化影响因素的研究,建立了苹果杂交种遗传转化体系为:在农杆菌菌液中添加150mg/LAS,叶片经农杆菌浸染5min后。在苹果杂交种再生培养基上暗培养2d、然后加入cef300mg/L和km15mg/L进入光照培养,能获得最佳的GUS基因瞬时表达率为41.4%。3.利用GUS组织化学染色、PCR和RT-PCR扩增的方法对苹果杂交种的km抗性植株进行了初步检测,结果表明表明,LEAFY基因已经整合进2个株系的基因组中,并且能够正常表达,转导率0.5%4.利用双向凝胶电泳分离转基因和对照植株的蛋白质,经PDQuest软件分析,转基因植株和对照植株的蛋白质图谱对比,有207个蛋白点相匹配,匹配率92%。转基因植株中出现差异蛋白点12个,其中新出现特异蛋白点4个,有6个蛋白点表达量上调,减少蛋白点2个。