论文部分内容阅读
MicroRNAs（miRNAs）是一类长度约为22 nt的内源性非编码小RNA，参与基因表达的转录后水平的调控，是个体发育、免疫保护、肿瘤发生等很多生理机能的重要调节分子。葡萄膜黑色素瘤是成人眼内最常见的原发性恶性肿瘤，预后差，其发病机制尚不明确。本实验室的前期研究发现，miR-142-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞中显著下调。我们进一步探索 miR-142-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞中的功能以及作用机制。 本研究采用荧光定量PCR明确了miR-142-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞和肿瘤组织中的表达水平显著下调。然后通过 MTS、克隆形成实验、细胞凋亡分析、划痕实验、Transwell实验，以及活体生物荧光成像技术，证明了miR-142-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖（包括体内）、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用，但不影响细胞的凋亡水平以及对阿霉素药物的敏感性。细胞周期分析和EdU实验结果显示，过表达miR-142-3p会导致葡萄膜黑色素瘤细胞的G1、G2期阻滞和DNA合成障碍。通过miRNA芯片分析，表明miR-142-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞中主要调控 TGFβ、MAPK、PI3K-AKT等信号通路，参与调节细胞的内吞作用、粘着斑、肌动蛋白细胞骨架、细胞连接等生物功能。我们进而筛选并利用荧光素酶报告分析和Western Blot，验证了CDC25C、TGFβR1、GNAQ、WASL和RAC1是miR-142-3p的靶基因。利用RNAi技术分别下调这些基因的表达后，都能抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖；其中下调TGFβR1、GNAQ、WASL和RAC1还有抑制细胞迁移的作用。另外下调CDC25C或RAC1的表达可以明显导致细胞周期阻滞和DNA合成障碍。在细胞形态上，敲减CDC25C和WASL会引起细胞伪足变短或变成圆球状，以及细胞聚集的现象，和过表达miR-142-3p引起的变化相似。综上，miR-142-3p通过调节CDC25C、TGFβR1、GNAQ、WASL和 RAC1靶基因进而影响葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭以及细胞形态。揭示了miR-142-3p在葡萄膜黑色素瘤中的功能和分子机制，为该疾病的临床诊断和治疗提供新的靶点和思路。