抑癌基因p16INK4在昆虫细胞中的表达

来源 :山东医科大学 山东大学医学院 山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whq59
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为进一步研究P16蛋白导入某些肿瘤生物治疗中的意义,作者将p16cDNA插入杆状病毒TnNPV-SVI-G,成功构建含p16cDNA之重组杆状病毒TnNPV-P16,并感染昆虫细胞(sf9细胞)获得具有生物学活性的P16蛋白.作者首先大量扩增含p16cDNA的质粒pBluescript-p16及转移载体质粒pSXIVVI<+>X<,3>,用EcoRI酶切二质粒DNA,并分别用Xhol及Xhol的同功酶SalI酶切pBluescript-p16与pSXIVVI<+>X<,3>DNA.然后将获得的含p16cDNA片段用定向克隆的方法连接到pSXIVVI<+>X<,3>载体片段上,构建了含p16cDNA的重组转移载体质粒pSXIVVI<+>X<,3>-p16.并用斑点杂交、PCR及酶切三种方法鉴定证实重组转移载体pSXIVVI<+>X<,3>-p16构建成功.作者的研究首次将p16cDNA插入杆状病毒中,并在昆虫细胞中成功表达出完整P16蛋白,为获得大量有生物学活性的P16抑癌蛋白并应用于肿瘤的基因研究与临床治疗奠定了基础.同时在研究过程中,作者根据该室的实际情况对一种新型杆状病毒表达系统P16蛋白过程的各个步骤的优化进行了探索研究,最终建立起一种能高效表达具有抑癌活性P16蛋白的真核基因表达系统.
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