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目的:通过桑椹的免疫作用的研究,初步确定其具有免疫作用的主要部位为桑椹多糖;通过对桑椹多糖的免疫、抗氧化作用的研究及其不同产地、成熟度等组别的含量测定对比,为今后桑椹资源和产品开发,提供一定理论基础。 研究方法: 1.用MTT法检测桑椹水提物与醇提物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,检测桑椹多糖对小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖活性的影响; 2.考察紫外分光光度法测定桑椹多糖含量的最佳条件; 3.用中性红法检测桑椹多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响; 4.用水杨酸捕捉法测定桑椹多糖对·OH的清除能力; 5.测定不同产地、成熟度、来源的桑椹中桑椹多糖的含量。 结果: 1.桑椹水提物及醇提物对正常小鼠脾淋巴细胞的影响 水提物的浓度为1g(生药)/ml与0.5g(生药)/ml时,对正常小鼠脾淋巴细胞有明显增殖作用(P<0.05),并依剂量呈一定线性关系。醇提物对正常小鼠脾淋巴细胞无明显增殖作用。结果表明桑椹中具有免疫作用的有效部位存在于桑椹水提物中。 2.桑椹多糖最佳提取方法 取过24目筛的桑椹药材粉末0.2g,精密称定,加80%乙醇溶液25ml,超声提取至无色。小心弃去醇液,将滤渣臵于水浴锅上挥干至无醇味。残渣精密加入蒸馏水25ml,称重,超声提取30min,放冷补重,过滤,取续滤液取续滤液稀释到合适的倍数,制备成供试品溶液。 3.桑椹多糖的免疫作用 多糖的浓度为1g(生药)/ml,对正常小鼠脾淋巴细胞有明显增殖作用(P<0.05),多糖浓度为0.5g(生药)/ml时,对正常小鼠脾淋巴细胞有非常显著性差异(P<0.01)。多糖浓度为1g(生药)/ml,0.5g(生药)/ml,0.25g(生药)/ml时,对正常小鼠巨噬细胞有非常显著性差异(P<0.01)。不同浓度的桑椹多糖处理小鼠巨噬细胞后,其吞噬中性红的活性与阴性组有差异。其中,多糖浓度为1g(生药)/ml,0.5g(生药)/ml时,能显著增强巨噬细胞的吞噬功能(P<0.01)。 4.桑椹多糖的抗氧化作用 多糖不同浓度对羟自由基的清除作用都随着浓度的增加而增大,对·OH的清除能力与其浓度具有一定的量效关系;其中多糖浓度2g/L与4g/L对羟自由基的清除作用最明显。 5.不同组分桑椹的多糖含量比较 桑椹在未成熟前多糖含量较低,成熟后各阶段多糖的含量相对稳定,趋于稳定;广西区内不同产地桑椹多糖含量以武鸣区的最高,钦州市的最低。药店所售桑椹药材多糖的含量较高,自制桑椹药材多糖的含量较低。 结论:初步确定桑椹提高免疫的主要成分为桑椹多糖;桑椹多糖主要药理活性为免疫作用及抗氧化作用;通过不同组分桑椹多糖含量比较,广西武鸣桑椹品质相对较好。