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口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是一种具有高度传染性和经济毁灭性的偶蹄动物疾病。虽然世界各地从20世纪初就开始试图使用疫苗来有效防控FMD,但是该病仍感染了全球数以百万计的动物,至今它仍是动物和畜产品贸易的主要公共卫生障碍。灭活疫苗是目前预防FMD最有效的方法。但是灭活疫苗有很多局限性：难以诱导机体产生长期的免疫保护；病毒有可能从生产设备逃脱；疫苗成品保质期短以及需要多种抗原成分来解决病毒抗原各型间的差异。所以本研究尝试通过设计新型疫苗来满足FMD疫苗生产的新需求。本试验应用基因重组技术,将生物软件预测的各型FMDV VP1基因表位嵌入到乳杆菌S-层蛋白基因特定部位,并在5’端引入乳酸菌来源的信号肽基因Usp45基因,3’端引入葡萄球菌A蛋白来源的具有细胞膜锚定作用的LPXTG基因,该融合基因命名为SLPMultiVP1.为验证其表达量,’首先构建了大肠杆菌表达载体：pGEX-SLPMultiVP1,并鉴定重组融合蛋白GST-SLPMultiVP1在大肠杆菌中的表达情况。其次将SLPMultiVP1基因克隆到穿梭表达载体pMG36e中,构建了乳酸菌表达载体pMG-SLPMultiVP1。经双酶切、PCR以及基因测序方法确定该重组载体的靶基因序列及阅读框的正确性后,将该重组载体电转化到发酵乳杆菌中。应用PCR方法筛选出阳性克隆后进行非诱导表达,对表达产物采用SDS-PAGE、Western blot和IFAT三种方法进行鉴定。试验结果如下：1.在大肠杆菌表达系统中,成功表达了融合基因SLPMultiVP1。经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定后发现,细菌裂解液中存在融合蛋白GST-SLPMultiVP.1,其大小为61KDa,其中GST标签蛋白分子量大小为26KDa,与理论值相符。2.在乳酸菌表达系统中,成功表达了融合基因SLPMultiVP1。经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,图谱相应位置上除了出现与理论值相符的35kDa的特异性条带以外,约在70kDa处,出现2倍于目的蛋白分子量的可疑条带。3.分别采用牛源A、O、Asia Ⅰ三型FMDV疫苗混合血清及鼠源FMDV高免血清,对重组发酵乳杆菌(含pMG-SLPMultiVP1)及对照发酵乳杆菌(含pMG36e)进行IFAT实验。结果发现：部分重组发酵乳杆菌被激发出明显的绿色荧光,而对照发酵乳杆菌则无荧光,并发现重组乳杆菌具有不同程度的粘连,而对照组无此现象,这可能与S-层蛋白黏附特性相关。本研究利用相关生物软件分析及分子生物学技术,进行多型FMDVVP1基因表位分析和活菌载体疫苗的构建,为研究安全有效的FMD新型疫苗积累了前期工作基础。