第一部分胆道闭锁肝组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达与肝纤维化关系的研究目的：肝脏进行性纤维化是影响胆道闭锁手术疗效的重要因素。本研究观察胆道闭锁肝组织中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达，探讨其与肝纤维化的关系，为胆道闭锁肝纤维化的治疗提供新的方法。方法：利用免疫组化法（S-P法）检测33例小儿胆道闭锁肝组织中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达。根据Ohkuma’s分级标准，其中肝纤维化Ⅰ级9例，Ⅱ级10例，Ⅲ例8例，Ⅳ级6例。另取12例新生儿正常肝脏组织作为对照组。并通过图像分析技术进行定量研究。结果：胆道闭锁肝组织中TGF-β₁、MMP-1、MMP-2、TIMP-1蛋白均有不同程度表达，以肝细胞胞浆、胞膜表达最为明显。①TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1蛋白在肝组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强，有正的直线相关性（r=0.6179，P＜0.05；r=0.5063，P＜0.05；r=0.5804，P＜0.05）。②MMP-1蛋白在肝组织中的表达，随肝纤维化程度的加重无明显变化，无直线相关性（r=0.2723，P＞0.05）。③TGF-β₁蛋白表达与MMP-2、TIMP-1间有直线相关性（r=0.9200，P＜0.01；r=0.7953，P＜0.01）；而TGF-β₁与MMP-1之间无相关性（r=-0.0594，P=0.7428）。图像定量分析结果：TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1在胆道闭锁肝组织的表达强度明显高于正常对照组（P＜0.01），而MMP-1在两组间的表达无显著性差异（P＞0.05）。结论：①TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1与胆道闭锁肝纤维化的发生、发展密切相关，随肝纤维化加重而表达增强。②TIMP-1对胆道闭锁肝纤维化的作用是间接性的，可能通过抑制MMP-1而发挥促纤维化作用。③TGF-β₁与MMP-2、TIMP-1有协同表达和调控作用，共同促进肝纤维化发展。④通过抑制胆道闭锁肝细胞TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1蛋白表达，或促进MMP-1的表达，可以成为治疗BA肝纤维化的新方法。第二部分胆道闭锁肝组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达与预后的关系目的：胆道闭锁患儿的预后受多种因素的影响如：年龄、病变的类型、肝纤维程度以及术后并发症等。肝脏进行性纤维化是影响胆道闭锁预后重要因素。本研究观察不同预后胆道闭锁肝组织中MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达与胆道闭锁预后的关系。方法：收集胆道闭锁患儿临床资料和肝脏组织标本19例；回顾总结19例胆道闭锁患儿术前血清生化指标包括总胆红素、直接胆红素、白蛋白、谷丙转氨酶等，将19例肝脏组织标本进行常规切片、HE染色。依据Ohkuma’s分级标准将肝组织纤维化程度分为Ⅰ～Ⅳ级。免疫组化（SP法）法检测肝脏组织MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TGF-β₁的表达，图像分析技术进行定量分析。结果：根据临床治疗效果将患儿分为预后良好组（7例）和预后不良组（12例）。对两组病人的观察指标进行分析比较。预后良好组与预后不良组接受手术时的平均日龄（分别为58.57±9.32；122.25±54.67）差别有显著性意义（P＜0.01）。预后良好组肝纤维化程度较预后不良组轻（P＜0.05）；而术前总胆红素、直接胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白水平差别无显著性意义（P＞0.05）。预后不良组TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1的表达明显高于预后良好组（P＜0.01），而MMP-1的表达在两组间无显著性差异（P＞0.05）。结论：①胆道闭锁病人预后与手术时年龄、肝纤维化程度密切相关；术前总胆红素、直接胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白水平不能提示病人的预后。②胆道闭锁肝组织TGF-β₁、MMP-2、TIMP-1与病人预后有关，其高表达预示患儿肝脏纤维化进展快，预后较差，应积极作为肝移植准备。第三部分基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-2及其组织抑制因子TIMP-1、TIMP-2在先天性胆总管囊肿壁的表达研究目的：观察先天性胆总管囊肿壁MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达，探讨其与先天性胆总管囊肿发生的关系。方法：收集53例先天性胆总管囊肿患儿临床资料以及囊肿壁和胆囊组织标本，其中男21例，女32例，年龄4月～17岁，平均年龄6.5岁，另取正常胆囊组织28例作为对照组。常规HE染色，观察囊肿壁组织形态学变化。免疫组化方法（SP法）检测MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达，图像分析技术进行定量分析。结果：HE染色光镜观察见45例（占85％）胆总管囊肿壁呈纤维增生改变，囊壁增厚，47例（89％）有微血管充血、炎性细胞浸润，50例（94％）见囊壁粘膜不同程度脱落、萎缩、连续性中断，伴有肌纤维断裂；病变程度较胆总管囊肿胆囊及对照组胆囊严重。MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白表达于胆总管囊肿壁粘膜上皮细胞、基质细胞及炎性细胞胞浆、胞膜；胆总管囊肿胆囊粘膜上皮细胞内也见不同程度表达。定量分析显示胆总管囊肿壁MMP-1、MMP-2蛋白表达强度明显高于胆总管囊肿胆囊及对照组胆囊（P＜0.01）；胆总管囊肿壁及其胆囊组织内TIMP-1、TIMP-2的表达强度均较对照组升高（P＜0.01），而在胆总管囊肿及其胆囊组织间差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：①由于胰胆管合流异常、胰液返流使胆总管壁粘膜、基质破坏、纤维组织增生，其病理变化程度较胆总管囊肿胆囊严重；胆总管囊肿壁存在细胞外基质的严重紊乱和破坏。②胆总管囊肿MMP-1、MMP-2的表达高于其胆囊组织；而TIMP-1、TIMP-2的表达无显著性差异，表明胆总管囊肿壁存在MMPs／TIMPs的比例失调，MMP-1及MMP-2的高表达可能与先天性胆总管囊肿的形成有关。