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目的: HIF-1α是乏氧时广泛存在于体内的一转录因子,它的高表达往往导致肿瘤细胞耐药性的增加。本研究用HIF-1α siRNA作用于A549/DDP细胞,观察其对顺铂耐药性的影响。
方法:用构建好的HIF-1α siRNA转染A549/DDP细胞,将实验分为A549/DDP组、A549/DDP低氧组、低氧A549/DDP+ siRNA阴性组、低氧 A549/DDP+siRNA阳性组四组。通过RT-PCR方法检测不同处理组中HIF-1α、MDR1、MRPmRNA表达的改变。用免疫组织化学的方法检测不同处理组中HIF-1α、MDR1、MRP蛋白表达的改变。MTT 法观察不同组间经不同浓度顺铂处理后细胞的死亡率。
结果: (1)不同处理组HIF-1α mRNA的表达分别为0.49±0.01,0.97±0.01,0.98±0.02,0.57±0.05;MDRlmRNA的表达分别为0.30±0.01,0.46±0.04,0.48±0.02,0.35±0.04; MRPmRNA的表达分别为0.21±0.01,0.90±0.01,0.91±0.02,0.60±0.09;HIF-1α与MDR1、MRP的表达在mRNA水平呈明显相关性。不同组间差异有显著性(P<0.05)。 (2)不同处理组HIF-1α的蛋白表达分别为2.57±0.36,4.00±0.59,4.02±0.14,2.97±0.09; MDR1的蛋白表达分别为1.71±0.40,2.92±0.55,2.78±0.15,2.18±0.15; MRP的蛋白表达分别为2.31±0.39,3.51±0.08,3.49±0.11,2.78±0.09:HIF-1α与MDR1、MRP的表达在蛋白水平呈明显相关性。不同组间差异有显著性(P<0.05)。(3)由MTT法绘制细胞死亡率曲线,不同组间A549/DDP细胞对顺铂的耐药性不同,组间差异有显著性(P<0.01)。可见转染HIF-1α siRNA后能明显降低缺氧条件下A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。
结论: (1)低氧条件下,肺癌细胞A549/DDP中的HIF-1a、MDR1、MRP的表达明显升高,且HIF-1a的表达与MDR1、MRP的表达呈明显正相关。(2)低氧条件下,肺癌细胞A549/DDP的耐药性增强,推测是由于HIF-1a升高调控MDR1、MRP的表达升高而引起。 (3)HIF-1α siRNA能显著下调HIF-1a的表达,并可能通过下调HIF-1a的表达而导致MDRl、MRP的表达明显下调。(4)低氧条件下,转染了HIF-1α siRNA后的肺癌细胞A549/DDP对顺铂的耐药性显著降低,推测是由于HIF-1a下调导致MDR1、MRP的表达下调而引起。从而为临床化疗耐药研究提供了新的靶点。