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弧菌是海洋环境中普遍存在的一种革兰氏阴性细菌。许多弧菌,如哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻胶弧菌等是海洋养殖鱼类的重要致病菌。最近几年研究表明病原细菌的外膜蛋白(outer membrane proteins,简称OMPs)在机体中具有保护性抗原的作用,所以OMPs作为疫苗开发的对象特别引起了人们的关注。在具有潜在保护作用的弧菌外膜蛋白中,有一种组分值得我们注意,那就是外膜蛋白K(outer membrane protein K,简称OmpK),它普遍存在于许多弧菌和发光细菌不同种中,是一种具有广泛宿主范围的噬菌体KVP40的受体。本研究根据哈维氏弧菌OmpK基因序列,3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从哈维氏弧菌基因组DNA和质粒pET-OmpK-GAPDH中通过PCR技术扩增外膜蛋白基因和融合基因OmpK-GAPDH,把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2%(w/v)的半乳糖诱导36 h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。同时利用大肠杆菌表达载体pQE-30,构建了哈维氏弧菌,副溶血弧菌,溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白K的重组大肠杆菌,IPTG诱导4 h后能够在大肠杆菌M15中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白K,SDS-PAGE检测分子量分别为29 kDa,30 kDa,30 kDa。用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白k的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫,采用间接ELISA的方法,利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白k检测免疫鱼类血清中抗体的产生;间接ELISA对大菱鲆特异抗体检测结果表明,实验组有效价,说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼类产生一定得抗体,但其平均效价却很低。