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菘蓝(Isatis indigotica Fortune)为十字花科菘蓝属草本药用植物、染料植物,根入药称"板蓝根",叶入药称"大青叶"。目前生产用的菘蓝栽培品种病虫害严重,降低了药材的产量和质量。本研究探讨了不同激素对菘蓝再生的影响,采用TDZ作为生长调节剂,成功地诱导了菘蓝无菌幼苗的子叶、下胚轴、茎尖和真叶外植体的再生。建立了高效率的菘蓝离体再生途径和农杆菌介导的高效遗传转化体系。成功地将cry1C基因导入菘蓝,为解决菘蓝虫害问题提供新的材料和方法。主要研究结果如下:1.比较发现,TDZ、6-BA、NAA单独使用和NAA与TDZ或6-BA组合使用均能诱导菘蓝下胚轴再生,0.05 mg/LTDZ单独使用可获得最佳的效果,不定芽分化率为97.44±4.44%,平均繁殖系数为19.88±2.07。TDZ还可高效诱导菘蓝真叶、子叶、茎尖再生。真叶、子叶、茎尖最合适的TDZ浓度为0.1 mg/L,0.05 mg/L和0.05 mg/L不定芽分化率最高分别为97.04±3.39%,72.22± 5.09%和92.22±1.92%。2.NAA和IBA都可诱导不定芽生根。使用0.5 mg/L NAA可取得最佳生根效果,生根率为93.54 ±3.03%。3.5 mg/L为有效的Basta筛选浓度。与Cef相比,抗生素Cb对外植体分化影响较小,更适用于筛选阶段农杆菌的抑制。4.真叶和下胚轴分别作为受体筛选30 d后Basta抗性率为17.19±5.65%和84.12±1.86%。预培养5 d为最合适的预培养时间。进行转化后用5 mg/L的Basta持续筛选90d-120d抗性材料阳性率达96.67%-100%。5.将pBar-gus载体中的目的基因导入菘蓝后,筛选120 d后得到46棵抗性苗,随机挑选9棵进行染色发现全为GUS阳性,转化效率为27.06%。对阳性苗的各生长期进行染色都呈GUS阳性,说明目的基因在T0代各个时期都有表达。6.将pBar-Cry1C载体中的目的基因导入菘蓝,提取T0代DNA进行PCR检测发现,有9棵为PCR阳性。对阳性苗各生长期观察发现,9棵阳性苗都能正常生长发育,并已收获可繁殖的转抗虫基因cry1C的菘蓝种子。