论文部分内容阅读
目的研究不同浓度生长抑素类似物奥曲肽对结肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;探讨奥曲肽对结肠癌细胞Wnt/β-catenin信号传导通路中相关基因及β-catenin和phosph-β-catenin蛋白表达的作用,寻找其作用靶点,进一步阐明生长抑素抗肿瘤作用机制。方法以人结肠癌细胞系SW480为实验对象,采用MTT比色法测定不同浓度奥曲肽对SW480细胞增殖的抑制作用;采用PI标记流式细胞术分析奥曲肽对SW480细胞凋亡与细胞周期的影响;利用基因芯片技术检测不同浓度奥曲肽对结肠癌SW480细胞Wnt/β-catenin信号传导通路中相关基因表达的影响,分析差异表达基因;应用Western-blot法分析不同浓度奥曲肽对SW480细胞中β-catenin及phosph-β-catenin蛋白表达的影响。结果1.奥曲肽能抑制SW480细胞的增殖,并在10-12 M -10-10M（mol/L）浓度范围内呈剂量依赖性,在48小时内呈时间依赖性。奥曲肽在10-10M时抑制作用最强（P﹤0.01）,10-13M以下对细胞增殖无抑制作用。2.奥曲肽能诱导SW480细胞凋亡,在10-12 M -10-10M范围内呈剂量依赖性。3.10-12 M -10-10M奥曲肽作用SW480细胞48小时后,细胞G1期逐渐增多,S期逐渐减少。4. 10-10M奥曲肽使结肠癌SW480细胞Wnt/β-catenin信号传导通路中30个基因发生差异性表达,其中上调13个基因,主要涉及促进β-catenin蛋白降解的基因;下调17个基因,主要涉及Wnt信号、参与Wnt信号传导及通路下游的基因。5. 10-14M奥曲肽（对结肠癌细胞生长无抑制作用）使结肠癌SW480细胞Wnt/β-catenin信号传导通路中27个基因发生差异性表达,其中上调21个基因,主要涉及促进β-catenin蛋白降解的基因;下调6个基因,主要涉及Wnt信号、参与Wnt信号传导的基因。6.奥曲肽能呈浓度与时间依赖性下调SW480细胞中β-catenin蛋白的表达。7.奥曲肽能呈浓度与时间依赖性上调SW480细胞中phosph-β-catenin蛋白水平。结论1.奥曲肽能抑制结肠癌细胞的增殖、诱导其凋亡、使其细胞周期受阻于G1期,并在一定范围内呈浓度与时间依赖性。2.首次证实奥曲肽对Wnt/β-catenin信号传导通路有抑制作用。3.奥曲肽能下调Wnt信号传导有关基因,能上调促进β-catenin蛋白降解的基因。4.奥曲肽能下调β-Catenin蛋白水平,上调phosph-β-Catenin蛋白水平。5.奥曲肽抑制结肠癌Wnt/β-catenin信号传导通路的剂量远低于抑制其生长的剂量。