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获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是一种以机体免疫系统严重损害为主要特征的传染性疾病,人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染是AIDS的基础。2015年为止,HIV全球感染人数达到3670万,严重危害人类健康。迄今为止,仍无保护性疫苗或能彻底清除HIV病毒的药物出现。因此研究安全有效的疫苗和抗病毒药物对于预防和治疗HIV有重大意义。自2009年以来,有大量强效广谱中和抗体和相应表位被报道,动物模型以及RV144疫苗的保护效果都证明诱导机体产生广谱中和抗体是疫苗设计的关键。HIV-1包膜糖蛋白gp120第三可变区(V3)对病毒的感染至关重要,在前期的研究中,我们通过HIV病毒免疫筛选到了特异针对HIV毒株NL4-3 V3表位的中和抗体,本研究将V3中和表位展示在CRM197-A和HPV-VLP上,评估V3中和表位的免疫原性和研究开发表位疫苗的可能性,进而为预防性疫苗和治疗性抗体的研究提供基础。在本研究中,我们将不同长度,不同型别的V3中和表位展示在CRM197-A和HPV-VLP上融合表达,通过中和实验和酶联免疫吸附实验(ELISA)评估小鼠体液免疫效果。基于实验室成熟的小鼠单克隆抗体筛选平台,利用基于免疫斑点印迹法(ELISPOT)的HIV中和抗体筛选平台筛选单克隆抗体,通过中和实验和ELISA对单抗进行性质分析。通过对小鼠血清监测结果和单抗性质分析,综合评价V3中和表位的免疫原性,进一步探索开发表位疫苗的可能性。在研究过程中,将不同长度,不同型别的V3中和表位融合CRM197-A和HPV-VLP为免疫原,血清监测结果显示CRM197-A-NL4-3-299-328和HPV-NL4-3-296-311融合蛋白免疫血清对HIVNL4-3有中和效果。CRM197-A-NL4-3-299-328融合蛋白免疫小鼠筛选到8株特异中和HIVNL4-3的中和单抗,其IC50大部分低于0.02μg/mL,是强效的型特异性中和单抗。HPV-NL4-3-296-311融合蛋白免疫小鼠筛选到20株中和单抗,其中和能力不一,大部分单抗能够结合不同型别的HIV包膜蛋白gp120,具有交叉亲和的效果。其中单抗4H4具有交叉中和的效果,对实验室现有毒株HIVNL4-3,HIV89.6,HIVMJ4,HIV94均有中和效果,IC50为12-15μg/mL。综上,本研究中,V3中和表位融合蛋白刺激小鼠产生高中和效价,筛选到了型特异性强效中和抗体,同时也有交叉中和抗体的产生,表明V3中和表位融合蛋白具有强的免疫原性,有诱导产生广谱中和抗体的潜力,为后续诱导广谱中和抗体抗原的设计和表位疫苗的研究提供基础。