【摘 要】
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Ⅱ型干扰素是一类重要的可溶性细胞因子,具有抗病毒、免疫调节和抗肿瘤等生物学功能。哺乳动物中,Ⅱ型干扰素仅具有一个成员,即IFN-γ。IFN-γ通过激活JAK-STAT信号通路诱导干扰
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Ⅱ型干扰素是一类重要的可溶性细胞因子,具有抗病毒、免疫调节和抗肿瘤等生物学功能。哺乳动物中,Ⅱ型干扰素仅具有一个成员,即IFN-γ。IFN-γ通过激活JAK-STAT信号通路诱导干扰素调节因子1(IRF1)等下游基因的表达,发挥其生物学效应。鱼类Ⅱ型干扰素具有两个成员,即IFN-γ和IFN-γ相关因子(IFN-γ related,IFN-γrel),它们的信号转导机制在鱼类中缺少报道。本研究以斑马鱼(Danio rerio)作为研究对象,探究了斑马鱼Ⅱ型干扰素对IRF1的诱导激活机制,进一步完善了鱼类Ⅱ型干扰素下游信号通路研究,在认识脊椎动物Ⅱ型干扰素系统的进化与功能方面具有重要意义。 本研究构建了斑马鱼的两个Ⅱ型干扰素真核表达质粒:IFN-γ和IFN-γrel。过表达分析发现斑马鱼的两个Ⅱ型干扰素均能诱导上调IRF1b基因。IFN-γ对IRF1b诱导激活能力强于IFN-γrel。此外,IFN-γ的过表达能同时上调STAT1a和STAT1b基因的表达,STAT1a的上调在12小时后被抑制,但STAT1b随IFN-γ过表达而持续上调。同哺乳动物IRF1基因一样,斑马鱼IRF1b基因启动子区域也存在序列保守的伽玛干扰素激活元件(IFN-γ-activation site,GAS)和NF-κB结合位点。荧光素酶活性分析发现IFN-γ能激活IRF1b启动子,而IFN-γrel则无法激活。将GAS位点突变后,分析发现IFN-γ无法激活GAS突变型IRF1b启动子,证实了斑马鱼IFN-γ通过IRF1b基因启动子上的GAS元件引发初次应答,表明斑马鱼IRF1b极可能是哺乳动物IRF1的直系同源基因。另外,过表达分析发现IFN-γ能够诱导上调IRF1b,但不能上调IRF1a,表明IRF1a和IRF1b可能受不同机制调控。
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