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目的:近年来,不孕症发病率逐年上升,卵母细胞体外成熟(IVM)技术作为一种治疗手段在卵巢反应不良及一些癌症患者生育力保存等的治疗中发挥重要作用。尽管IVM技术在动物中的应用已较成熟,但在人类的应用中仍存在较多问题。因此,探讨卵母细胞减数分裂的调节机制,获得优质卵子成为该技术临床应用的重要课题。既往研究中,泛素-蛋白酶体通路、磷脂酰肌醇通路及环磷酸腺苷通路等均参与调节卵母细胞的减数分裂。后基因组时代,长链非编码RNA(lncRNA)功能被揭示,可通过参与染色体重组、基因组印记、内源性siRNA形成及蛋白质功能调节等,影响配子发生、胚胎形成、细胞分化及生长发育等生物学过程。前期研究发现,lncRNA uc.308高表达于未成熟卵母细胞,且与Btrc基因序列反向互补。本研究旨在分析lncRNA uc.308在哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟过程中的作用,并且以Btrc为机制研究的切入点,深入分析lncRNA uc.308影响卵母细胞成熟的分子机制。方法:(1)运用实时荧光定量PCR法检测lncRNA uc.308在卵母细胞成熟过程中的表达模式。(2)采用荧光原位杂交(FISH)的方法检测lncRNA uc.308在卵母细胞中的亚细胞定位。(3)通过在GV期显微注射lncRNA uc.308使其过表达,进而研究其对卵母细胞减数分裂成熟的影响,并对微丝蛋白F-actin及微管蛋白b-tubulin进行荧光染色检查以分析其过表达是否影响小鼠卵母细胞的细胞骨架。(4)GV期显微注射lncRNA uc.308使其过表达,采用实时荧光定量PCR法检测Btrc基因的表达水平,并采用挽救实验的方法,在GV期显微注射lncRNA uc.308+Btrc siRNA,检测Btrc基因的表达水平及卵母细胞第一极体排出率,进而研究lncRNA uc.308影响卵母细胞成熟的可能机制。结果:(1)LncRNA uc.308在卵母细胞减数分裂的各个阶段均有表达,GV期及GVBD期表达水平较高,MI期明显下降,在MII期略有回升。(2)在GV期及GVBD期,lncRNA uc.308的信号弥散分布于细胞质中,MI期时,主要聚集于染色体周围,另有少量聚集于细胞膜。(3)GV期显微注射lncRNA uc.308使其过表达后,卵母细胞MI形成率较对照组略高,而MII形成率较对照组明显下降,纺锤体的形态未见明显异常。(4)GV期显微注射lncRNA uc.308使其过表达后,Btrc基因的表达在GV期时较对照组下降,MII期时较对照组升高。挽救实验中,Btrc基因的表达水平较lncRNA uc.308过表达组下降,且卵母细胞第一极体的排出率下降水平得到缓解。结论:LncRNA uc.308在卵母细胞减数分裂的各个阶段均有表达,GV期及GVBD期表达水平较高,弥散分布于细胞质中,MI期明显下降,呈现染色体周围聚集模式,另有少量聚集于细胞膜。LncRNA uc.308在GV期过表达后,造成卵母细胞第一极体排出率明显下降、异常分裂概率增加。并且lncRNA uc.308过表达后引起相关基因Btrc的表达水平在GV期时下降,MII期时显著升高,进一步通过GV期共注射Btrc siRNA使Btrc基因表达下调后,Btrc基因在MII期的表达水平相对下降,且卵母细胞第一极体排出率的下降水平得到缓解,提示lncRNA uc.308影响卵母细胞成熟过程的作用与Btrc基因密切相关。