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本研究采用酶活性检测、蛋白质组学技术、实时荧光定量PCR、基因克隆技术和生物信息学分析等实验方法,以老年低额溞为实验对象,初步探索了槲皮素对老年低额溞抗衰老的分子机理。结果如下:1槲皮素可以延长老年低额溞的寿命,维持机体健康并对其生长相关参数无负面作用不同浓度槲皮素溶液(0、1、2.5、5、10 mg/L)分别处理活性较好的新生的老年低额溞,每隔24 h更换培养液并观察记录死亡数、蜕壳数、生殖量以及生殖时间,直到所有的个体全部死亡。绘制生存曲线,利用公式计算净生殖率、内禀增长率和世代周期等生长相关参数,显微镜下测量水溞体长,并检测代谢指标ACP、AKP、T-CHO、NEFA、TG、Glu、AMS和CMCA。结果显示:适量的槲皮素可以延长老年低额溞的绝对寿命与平均寿命,且对水溞净生殖率、内禀增长率和世代周期无显著影响,长期槲皮素处理也不会对其体长产生副作用;槲皮素可以调节水溞消化酶活性,维持脂代谢和免疫力较健康水平。提示:槲皮素可以延长老年低额溞的寿命,维持机体健康并对其生长相关参数无负面作用。2槲皮素主要通过影响老年低额溞碳水化合物代谢延缓衰老不同浓度槲皮素(0、1 mg/L)对新生的老年低额溞处理7 d。蛋白质组学技术对水溞蛋白质进行测序比对,生物信息学技术进行可信蛋白和差异蛋白筛选,以及GO富集分析和KEGG Pathay富集分析。结果显示:老年低额溞槲皮素处理组筛选出156个差异显著蛋白,其中差异显著上调蛋白84个,差异显著下调蛋白72个;槲皮素显著增强老年低额溞以淀粉和蔗糖代谢为首的碳水化合物代谢。提示:槲皮素主要通过影响老年低额溞碳水化合物代谢延缓衰老。3槲皮素可以降低老年低额溞的氧化损伤程度且在转录水平上其抗氧化酶基因和热休克蛋白基因的表达显著上调槲皮素分别处理新生的老年低额溞7 d(0、1、2.5、5、10 mg/L)、14 d(0、1、2.5、5、10 mg/L)和21 d(0、1 mg/L)。检测水溞蛋白质羰基化程度和MDA含量,实时荧光定量PCR技术分析水溞抗氧化酶基因和热休克蛋白基因表达量。结果显示:槲皮素显著降低老年低额溞蛋白质羰基化的程度与MDA的含量;槲皮素处理7 d,Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、GPX、GST和HSP70、HSP90显著上调,处理14 d,CAT和HSP70、HSP90的表达量显著上调,GPX和GST表达量显著下调,处理21 d,HSP90显著下调,其余基因均无显著变化。提示:槲皮素可以降低老年低额溞氧化损伤程度且在转录水平上其抗氧化酶基因和热休克蛋白基因的表达显著上调。4 老年低额溞的Mn-SOD基因和Sir2基因均已被成功克隆且在转录水平上槲皮素可以显著上调Mn-SOD基因和Sir2基因的表达槲皮素分别处理新生的老年低额溞7 d(0、1、2.5、5、10 mg/L)、14 d(0、1、2.5、5、10 mg/L)和21 d(0、1 mg/L)。基因克隆技术对目的基因全长进行克隆,生物信息学技术对目的基因c DNA序列进行分析并预测其编码的蛋白质结构,实时荧光定量PCR技术分析目的基因的表达量。结果显示:Mn-SOD基因全长为736 bp,56 bp的5’UTR,32 bp的3’UTR,648 bp的ORF,共编码215个氨基酸,Sir2基因全长为1974 bp,19 bp的5’UTR,140 bp的3’UTR,1815 bp的ORF,共编码604个氨基酸;Mn-SOD基因编码的蛋白质为同源四聚体,Mr=24.36 k Da,p I=8.42,Sir2基因编码的蛋白质为异二聚体,Mr=67.38 k Da,p I=4.69;槲皮素处理在转录水平上可显著上调Mn-SOD基因和Sir2基因的表达。提示:老年低额溞的Mn-SOD基因和Sir2基因均已被成功克隆且在转录水平上槲皮素可以显著上调Mn-SOD基因和Sir2基因的表达。