论文部分内容阅读
越来越多的证据表明,遗传因素是脑梗死(cerebral infarction,CI)发生发展的重要原因.弄清其遗传背景,对预防和治疗CI有重要意义.材料与方法:1、研究对象:均为广东地区汉族人,饮食结构相似,各研究对象之间无血缘关系.CI组为临床确诊的CI患者136例,并根据统一标准进行分组、分型;对照组共70例,为性别、年龄与CI组相匹配的同期住院的非脑卒中病例.所有研究对象均除外糖尿病、癌症、肝肾功能不全、甲状腺疾病、接受器官移植、严重营养不良等疾病,并排除近1个月内服用影响血Hcy浓度的药物(如:避孕药、苯妥英钠等抗癫痫药物、多巴胺类药物、叶酸或VitB<,12>等)者.2、人外周血白细胞DNA的提取:静脉血2ml,EDTA抗凝,采用美国Gentra公司的DNA抽提试剂盒,抽提基因组DNA.3、MTHFR基因C677T多态性的检测:参照文献设计引物,PCR扩增MTHFR基因后的产物长度为246bp,产物用HinfI限制性内切酶酶切,用2.5％的琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切后的产物长度.4、MTRR基因A66G多态性的检测:参照文献设计引物,PCR扩增MTRR基因后的产物长度为151bp,产物用NdeI限制性内切酶酶切,用3.5％的琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切后的产物长度.5、MS基因D919G多态性的检测:参照文献设计引物,PCR扩增MTRR基因后的产物长度为189bp,产物用Hae Ⅲ限制性内切酶酶切,用3.0％的琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切后的产物长度.6、血浆Hcy、叶酸、VitB<,12>浓度测定:抽取研究对象清晨空腹静脉血4ml,半小时内离心(3000rpm,10min),分离出血浆,-20℃保存待测.用荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunassay,FPIA)检测血浆总Hcy.微粒子酶免分析法(microparticle enzyme immunoassay,MELA)测定血浆叶酸、VitB<,12>浓度.7、统计学分析:用SpSS11.5统计软件进行分析,计算上述3个基因的基因突变率、等位基因频率、基因型频率、基因多态性与疾病的相关性及相对危险度.计量资料组间比较用独立样本t检验,配对t检验和单因素方差分析,计数资料组间比较用x<2>检验.基因型及等位基因相对风险率以比数比(Odds Ratios,OR)及95％可信区间表示,显著水平用x<2>检验,及Logistic回归分析确定独立危险因素.结论:1、轻-中度HHcy在CI患者中常见,是CI的独立危险因素;血浆Hcy水平与病情呈直线正相关,病情越重,血浆Hcy越高.使用叶酸等维生素干预治疗能有效降低血浆Hcy水平.2、该组病例中,MTHFR基因C677T多态性是HHcy的中度遗传危险因素.MS基因D919G突变可以引起血浆Hcy降低,但作用相对较弱.而MTRR基因A66G多态性与血浆Hcy水平无明显相关性.3、MTHFR基因C677T、MTRR基因A66G突变在决定血浆Hcy水平上,可能存在协同作用.MTHFR/MS/MTRR的复合基因型中的+/-/+型可能是血浆Hcy浓度升高的易感基因型.4、MTHFR基因CC型、MS基因DG型可能对中重型CI有一定的保护作用.MTHFR基因CC型可能对大血管CI有一定的保护作用,而CT型可能易患大血管CI.MTRR基因A66G多态性与CI无显著相关.5、MTHFR/MTRR、MTHFR/MS、MTRR/MS和MTHFR/MS/MTRR的各复合基因型在CI组和对照组之间的分布无显著性差异.6、在广东地区汉族人中,MTHFR基因C677T、MS基因D919G和MTRR基因A66G的突变均较常见,尤其是后者.但三种多态性与西方人种有一定差异,可能均存在人种或地域差异.