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机体内脂质代谢平衡被破坏,就会引起大量的的脂质在肝脏内沉积形成脂肪肝。Sirtl基因在脂质代谢中起着重要的调控作用,但其具体调控机制还不明确；PI3K-Akt-mTOR信号通路参与调控糖脂代谢等新陈代谢活动,而其具体机理也是目前的研究热点之一；两者在脂质调控中是否存在相互作用,目前鲜见报道,因此本试验通过不同浓度的尼克酰胺(Nicotinamide)处理鹅原代肝细胞,检测Sirt1和脂质代谢关键因子的表达变化；然后在选出的最佳尼克酰胺浓度处理鹅原代肝细胞的基础上,添加不同的PI3K-Akt-mTOR信号通路抑制剂LY294002、NVP-BEZ235、雷帕霉素(Rapamycin)处理培养,检测脂肪酸合成与氧化、VLDL的生成和分泌、PI3K-Akt-mTOR信号通路关键因子和Sirt1本身的表达变化,分析Sirt1通过PI3K-Akt-mTOR信号途径调控脂质代谢的机理。主要研究结果如下：1.不同浓度尼克酰胺处理鹅原代肝细胞,Sirtl的mRNA表达水平和蛋白浓度随着尼克酰胺浓度升高而降低；尼克酰胺处理浓度为100μmol/L时,Sirt1蛋白浓度为对照组的51.50%;2.不同浓度尼克酰胺处理肝细胞,促进脂肪酸合成关键因子SREBP1、FAS、ACCa表达(P<0.05),抑制脂肪酸氧化关键因子PPARα、PPARγ、ACOX1、CPT1的表达(P<0.05),下调脂质转运关键因子FoxO1、MTTP、DGAT1、DGAT2的表达水平(P<0.05)；尼克酰胺处理也能增加胞内TG含量(P<0.05),减少VLDL和胞外TG含量(P<0.05),诱导肝细胞内脂滴增大增多、脂质含量上升(P<0.05),脂质沉积增加;3.鹅肝细胞添加100μmol/L的尼克酰胺处理后,PI3K-Akt-mTOR信号通路关键因子P13K的表达被抑制(P<0.05), mTOR表达被上调(P<0.05), Akt1表达无显著性变化(P>0.05)；再添加通路抑制剂LY294002时,mTOR、Akt1表达被下调,PI3K表达与尼克酰胺单独处理无显著性差异；而当再添加通路抑制剂Rapamycin时,mTOR、Akt表达降低,而PI3K表达较尼克酰胺单独处理显著升高；当在添加NVP-BEZ235双重抑制信号通路时,Akt表达与对照组无显著性差异,mTOR被下调,PI3K表达较尼克酰胺单独处理无显著性差异。再添加NVP-BEZ235抑制剂时,Sirt1表达与尼克酰胺单独处理无显著性差异,而当再添加另外两种通路抑制剂时,Sirtl表达显著降低(P<0.05)；4.最佳浓度100μmol/L的尼克酰胺处理鹅肝细胞,抑制Sirtl表达,导致脂肪酸合成关键因子表达增加；而添加通路抑制剂LY29002、NVP-BEZ235、Rapamycin时,脂肪酸合成关键因子表达被显著下调(P<0.05),而且NVP-BEZ235的效果最强；5.通路抑制剂LY294002、NVP-BEZ235和尼克酰胺共处理鹅肝细胞,能减弱尼克酰胺单独处理对脂肪酸氧化关键因子的抑制效果,而且添加NVP-BEZ235的这种减弱效果更强；但是脂肪酸氧化关键因子CPTl蛋白表达上却是添加LY294002时最高(P<0.05)；6.脂质转运关键因子能被尼克酰胺所抑制,当再添加抑制剂LY294002、 NVP-BEZ235和Rapamycin时,脂质转运关键因子表达被进一步下调；但是,DGAT1的mRNA表达水平在添加LY294002时被显著上调了(P<0.05)；同样FoxO1的mRNA表达水平和蛋白浓度在添加NVP-BEZ235处理时显著升高(P<0.05);7.100μmol/L的尼克酰胺能显著提高肝细胞活性,增加肝细胞内TG等脂质的含量,减少VLDL的生成分泌和胞外TG含量；当添加通路抑制剂LY294002、NVP-BEZ235时,细胞活性变化不大,肝细胞内TG等脂质含量显著降低(P<0.05),VLDL和胞外TG含量高于尼克酰胺单独处理组；而添加通路抑制剂Rapamycin时, VLDL和胞外TG含量最低：油红O染色发现,添加通路抑制剂之后,肝细胞内脂滴减少变小,脂质含量降低(P<0.05),肝细胞内脂质沉积作用减弱；