论文部分内容阅读
妊娠是一个复杂而精细的过程,妊娠成功及维持依赖于滋养细胞正常发挥侵袭功能。滋养细胞的侵袭具有严格的时空性,其侵袭能力在早孕期增强,中、晚孕期降低甚至消失,其侵入深度仅限于蜕膜和近1/3子宫肌层。大量研究证实,MMPs/TIMPs的平衡表达在人胚胎植入期起主要作用,然而其调控机制目前尚不清晰。近年来研究发现滋养细胞表达瘦素,妊娠8周时植入位点检测到瘦素受体的表达,因此推测瘦素及其受体系统可能参与滋养细胞MMPs/TIMPs的表达及胚泡植入过程的调节。目的:观察体外模拟早孕微环境(雌激素、孕激素)条件下瘦素对人妊娠早期绒毛滋养细胞MMPs/TIMPs表达的影响,初步探讨其对滋养层细胞侵袭调控机制及意义。方法:选取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(6-9周),按常规方法分离绒毛外滋养细胞,免疫组化染色(细胞角蛋白7、波形蛋白)鉴定绒毛外滋养层细胞。将分离培养的绒毛外滋养层细胞分为空白对照组、雌激素+孕激素组,37℃、5%CO2培养24h后换为无血清培养基继续培养24h,收集上清,ELISA检测可溶性瘦素受体。收集细胞后流式细胞术检测瘦素受体表达。根据结果继续进行下一步实验,37℃、5%CO2培养24h后换为无血清培养基,分为空白对照组、雌激素+孕激素组、瘦素组、雌激素+孕激素+瘦素组,置37℃、5%CO2继续培养24h,收集滋养细胞及培养上清,收集的细胞用RT-PCR检测MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1mRNA;酶谱检测上清中MMP-2、MMP-9表达。结果:1、分离培养的人绒毛外滋养层细胞经免疫组化染色(细胞角蛋白7、波形蛋白)鉴定纯度大于90%。台盼蓝染色后,细胞活力大于90%。2、流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,雌、孕激素联合处理组绒毛外滋养层细胞瘦素受体表达显著上调(P<0.05)。3、对照组、雌孕激素联合处理组绒毛外滋养层细胞培养上清中未检测到可溶性瘦素受体。4、RT-PCR检测结果显示,与对照组相比,雌激素+孕激素联合处理组、单纯瘦素处理组、雌激素+孕激素+瘦素处理组绒毛外滋养层细胞MMP-2、MMP-9 mRNA均显著上调,TIMP-2均表达下调(P<0.05);且与雌激素+孕激素联合处理组和单纯瘦素处理组相比,雌激素+孕激素+瘦素处理组MMP-2、MMP-9均显著上调,TIMP-2表达下调(P<0.05)。但是与对照组相比,雌激素+孕激素组和瘦素处理组TIMP-1表达无显著差异(P>0.05);雌激素+孕激素+瘦素处理组TIMP-1表达下调。与雌激素+孕激素联合处理组和单纯瘦素处理组相比,雌激素+孕激素+瘦素处理组TIMP-1表达下调(P<0.05)。5、明胶酶谱检测结果显示,与对照组相比,雌激素+孕激素联合处理组、单纯瘦素处理组、雌激素+孕激素+瘦素处理组绒毛外滋养层细胞培养上清中MMP-2、MMP-9表达显著上调(P<0.05);与雌激素+孕激素联合处理组和单纯瘦素处理组相比,雌激素+孕激素+瘦素处理组MMP-2、MMP-9表达显著上调(P<0.05)。结论:分离培养的人绒毛外滋养层细胞强表达膜型瘦素受体,不表达可溶性瘦素受体,存在瘦素-瘦素受体作用途径。瘦素通过瘦素-瘦素受体途径上调绒毛外滋养层细胞MMP-2、MMP-9的表达,参与滋养细胞侵袭调控。同时瘦素-瘦素受体途径在早孕微环境中增强雌、孕激素联合对MMP-2和MMP-9的上调作用,下调TIMP-1和TIMP-2的表达。该调节途径可能通过调控MMPs/TIMPs的平衡来调节滋养细胞侵袭性。