小麦体细胞杂种优质HMW-GS基因真核表达载体的构建及其对小麦新品种的遗传转化

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小麦是世界上重要的粮食作物之一,也是人类食物的主要来源,因此人们非常重视小麦及其加工品质的研究。小麦面粉的加工品质决定于其种子的胚乳储藏蛋白,其中高分子量麦谷蛋白亚基主要决定其黏弹性和面包加工品质,不同的高分子量麦谷蛋白亚基及亚基组合对小麦面粉品质的贡献不同,小麦高分子量麦谷蛋白亚基的不同组成与比例导致小麦面粉的品质差异。 随着分子克隆技术和遗传转化技术的发展,小麦和近缘生物中优质高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)基因不断被克隆,使利用基因工程改造小麦,以提高其加工品质成为可能。将优质的高分子量麦谷蛋白亚基的基因,通过遗传转化导入高产但是并不优质的推广小麦新品种中,使其在其中表达,既增加了受体小麦胚乳蛋白新的高分子量麦谷蛋白亚基,同时也可提高其高分子量麦谷蛋白的含量,从而提高其加工品质。 本实验将从小麦济南177与高冰草体细胞杂种渐渗系中分离克隆的优质HMW-GS新基因一类似小麦的1Bx13和1By16的基因,分别与高分子量麦谷蛋白亚基1Bx17的启动子序列连接后,克隆到植物表达载体pBIN20上,该载体具有nptⅡ筛选标记,将载体转入农杆菌AGL1中,并利用小麦生长点浸染法混合转化高产但不优质的推广小麦新品种泰山23,然后用50μg/ml的卡那霉素筛选转化后的幼苗,筛选后共有99棵小麦成活。经PCR检测共有23棵PCR阳性。对42棵T0代植株的种子储藏蛋白进行了SDS-PAGE分析,3棵植株的种子储藏蛋白SDS-PAGE电泳中出现了2条新的电泳条带,4棵出现了与1Bx13亚基大小一致的条带,对这些种子的T1代植株进行基因组DNA的Southern blot检测,检测到了目的基因信号,证明目的基因转入到受体小麦中,并且能够有效表达和遗传。T1代植株正在培育中,将要进行对子代种子储藏蛋白及品质分析,以期获得优质高产的小麦新品系。
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