目的:本研究的目的是通过iTRAQ蛋白质组学方法确定胃癌(GC)的特异性生物标记物。方法:利用iTRAQ方法来研究Her-2阴性的人类III–IV期胃癌中特定蛋白表达的差异。我们使用基因本体论(GO)和路径分析来研究特异表达蛋白质在肿瘤产生过程中起到的作用。选择差异表达的蛋白,通过免疫印迹和免疫荧光染色进行验证。同时我们还使用了人胃癌细胞株进行了细胞迁移和侵袭实验,来检验这些蛋白质在肿瘤转移中的作用。结果:1、我们从四对胃癌和癌旁正常组织样本中(III-IV期,HER-2阴性)提取蛋白质做iTRAQ,发现了在四对样本中,胃癌与癌旁相比有10个蛋白上调9个蛋白下调。上调的蛋白主要与细胞能动性有关,下调的蛋白与能量代谢中的线粒体酶有关。2、我们对三个上调蛋白(AnnexinA1,NNMT,Fibulin-5)和其中一个下调蛋白(UQCRC1)的表达通过western blot在97对胃癌和癌旁正常组织样本中进行了验证。在I/II的胃癌样本中,癌症组织与癌旁组织相比,Annexin A1上调了61.36%,并且在III/IV样本中上调的更多。3、在胃癌细胞中,用siRNA敲低AnnexinA1会使其细胞迁移和侵袭能力变弱,而过表达AnnexinA1则会促进其细胞的迁移和侵袭能力。我们发现在所有阶段的胃癌样本中UQCRC1的表达量都下降,并且我们的数据表明,参与细胞能动性蛋白的表达增强和参与线粒体能量代谢蛋白的表达下降是胃癌发展阶段的重要标志。结论:我们的研究揭示了AnnexinA1,NNMT,Fibulin-5和UQCRC1在胃癌发生和发展中的作用。还发现了胃癌发展中UQCRC1蛋白低表达。未来的研究将会阐明这些蛋白质如何参与胃癌的发生与发展。