【摘 要】
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鹅副粘病毒(Goose Paramyxovirus,GPMV)与新城疫病毒(New castle disease virus,NDV)基因核苷酸同源性来看,GPMV与NDV属于同种病毒,GPMV是NDV的一个变异,而不是一个新种病毒,是NDV
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鹅副粘病毒(Goose Paramyxovirus,GPMV)与新城疫病毒(New castle disease virus,NDV)基因核苷酸同源性来看,GPMV与NDV属于同种病毒,GPMV是NDV的一个变异,而不是一个新种病毒,是NDV毒株在水禽上引起发病,且病毒毒力加强。但是,GPMV与传统的NDV又有不同,差异主要在血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)及融合蛋白(Fusion protein,F)上,常规的NDV疫苗不能提供有效的保护,因此从分子生物学水平上对该病进行研究具有重要的意义。HN和F蛋白是GPMV诱导体液免疫的重要靶抗原,在抗病毒免疫中起着重要作用,无疑HN和F基因已成为研制GPMV基因工程苗及免疫监测试剂的首选基因。本试验根据GenBank所发表的HN及F基因的cDNA序列,利用Primer5.0软件,参照昆虫细胞杆状病毒表达系统的质粒图谱,设计引物,以本实验室所保存的pMD18-T-HN及pMD18-T-F阳性质粒为模板扩增出HN及F基因,分别命名为pMD18-T-GPMV-HN及pMD18-T-GPMV-F。将其克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A的XhoⅠ和EcoRⅠ之间的多克隆位点上,分别命名为pBlue-GPMV-HN及pBlue-GPMV-F。纯化该重组质粒并与杆状病毒共转染Sf9昆虫细胞,4d后获得重组病毒,名为P1。将经过3轮蚀斑筛选纯化,PCR鉴定获得重组病毒,分别命名为rBv-HN及rBv-F。将重组病毒反复扩毒3次,获得高浓度的重组病毒名为P3,接种Sf9单层细胞上,4d后收获病变细胞,经SDS-PAGE电泳鉴定,表达F蛋白分子量约为60ku,表达HN蛋白分子量约为66ku,与理论值相符。表达产物HN蛋白的Western blot和Dot-ELISA结果表明其可与鸡抗GPMV血清发生特异性抗原反应,证实所表达的HN蛋白有较好的反应原性。本研究将株的HN及F基因利用昆虫杆状病毒表达系统中表达,并获得了HN主要抗原位点基因的表达,对GPMV的基础性研究、预防控制和病毒诊断试剂研制奠定重要的物质基础。
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