糖尿病足是糖尿病最常见的严重并发症之一,其治疗是国内外的热点与难点。糖尿病足导致的截肢率及病死率处于较高水平。有文献报道新发的糖尿病足经治疗后5年生存率仅为50%~60%。中医药在治疗过程中积累了丰富的临床经验,特别是外治法在治疗糖尿病足领域中具有巨大优势和潜力。本课题建立大鼠糖尿病足溃疡创面模型,探讨畲药“十二时辰”复方高、中、低剂量组对大鼠创面愈合、病理改变方面的影响。以Wnt信号通路为切入点,研究十二时辰复方促进糖尿病足溃疡创面修复的机制。并研制十二时辰复方外用软膏剂,以便于携带及应用。本论文主要分为三个章节:第一章十二时辰复方对大鼠糖尿病足创面愈合的影响将SPF级雄性wistar大鼠随机分为空白对照组和糖尿病组。通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠产生高血糖,空腹血糖应≥16.7 mmol/L。对高血糖大鼠进行足部皮肤切除,建立大鼠糖尿病足溃疡模型;空白对照组大鼠未注射STZ并进行足部皮肤切除术。糖尿病足溃疡模型大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、十二时辰复方高、中、低剂量组,每组20只;空白对照组为进行皮肤切除的20只正常大鼠。治疗周期14天,于给药第3天、7天、10天、14天观察各组大鼠的创面愈合情况,测量并计算创面愈合率。空白对照组的平均创面愈合率分别为45.89%、68.89%、80.57%、94.63%,模型对照组分别为23.98%、43.90%、56.01%、75.78%,空白对照组愈合率显著高于模型对照组(p<0.01);中剂量组的平均创面愈合率分别为36.83%、61.95%、73.48%、91.02%,阳性对照组分别为34.74%、54.58%、74.05%、90.38%,中剂量组愈合率显著高于模型对照组(p<0.01),与阳性对照组无显著性差异。给药第14天,除模型对照组愈合率较低,其余各组大鼠无显著性差异,创面基本愈合。结果表明,各组大鼠的创面愈合率均随着各时间点的增加呈逐渐升高趋势,空白对照组血糖正常其创面愈合程度最佳;中剂量组治疗效果与阳性对照组无显著性差异,均能促进创面组织修复。大鼠糖尿病足溃疡的愈合周期约为14天。第二章十二时辰复方治疗大鼠糖尿病足的机制研究将上述大鼠分别于给药的第3天、第7天、第10天3个时间点各组随机取5只,采集溃疡创面组织后处死。将采集到的组织样品分别进行HE染色观察创面组织形态学结构,Western blot检测β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达水平。结果表明:1.HE染色观察:与空白对照组相比较,模型对照组创面炎症持续时间久,中剂量组在三个剂量组中效果最佳,成纤维细胞和新生血管出现时间早且数量多,肉芽组织成熟速度较模型对照组快,促进创面愈合情况与阳性对照组无显著性差异。2.β-catenin、GSK-3β蛋白表达:给药第3天、7天、10天,与空白对照组相比,模型对照组的β-catenin蛋白表达水平较低,GSK-3β蛋白表达水平较高,有统计学差异(p<0.05);给药第7天、10天,中剂量组的β-catenin蛋白表达水平高于模型对照组(p<0.01),GSK-3β蛋白表达水平低于模型对照组(p<0.05),与阳性对照组相比无显著性差异。十二时辰复方能够升高β-catenin蛋白表达,降低GSK-3β蛋白表达,十二时辰复方治疗糖尿病足的机制与Wnt信号通路中的下游蛋白β-catenin、GSK-3β有关。第三章十二时辰复方软膏剂制备工艺的研究比较不同基质的软膏剂处方的稳定性,选出最佳基质处方进行单因素考察,在此基础上采用Box-Behnken设计,选出最佳软膏基质配比;以药物与基质的不同比例制备药膏,确定十二时辰复方软膏剂的最佳含药量,并观察软膏剂的外观性状。结果表明,最佳基质配方为以聚山梨酯为乳化剂的O/W型基质,最佳基质的配比为单硬脂酸甘油酯:吐温-80:白凡士林(0.8:4:3)。综上所述,十二时辰复方能够有效促进大鼠糖尿病足溃疡创面愈合,其中中剂量组效果最佳。且其促愈大鼠糖尿病足的机制与抑制Wnt通路有关,能够升高β-catenin蛋白表达,降低GSK-3β蛋白表达,并初步研制十二时辰外用软膏剂。