添加甘蓝3号染色体片段的AT3-11等大白菜易位系筛选及鉴定

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为创建大白菜—结球甘蓝异源易位系,本研究以大白菜—结球甘蓝3号单体异附加系(AA+C3)为试材,用60Co-γ射线对其植株进行辐射,对辐射前后植株进行自交和游离小孢子培养,并对获得的自交后代和小孢子植株进行细胞学和InDel标记鉴定,从54个小孢子植株及46个自交后代中初步筛选出8个添加结球甘蓝3号染色体片段的大白菜—结球甘蓝易位系,为大白菜的遗传与育种提供了基础研究材料。主要研究结果如下:1.对大白菜—结球甘蓝3号单体异附加系(AA+C3)进行游离小孢子培养,利用结球甘蓝C02连锁群(位于结球甘蓝3号染色体)相对于大白菜的特异InDel标记对获得的小孢子植株进行鉴定,从17个小孢子植株中筛选出1个具有结球甘蓝特异条带的植株。花粉母细胞减数分裂观察结果显示,该植株染色体数为20条,为添加结球甘蓝3号染色体片段的大白菜—结球甘蓝易位系,命名为AT3-11。通过对InDel标记的加密设计,明确了该植株中外源甘蓝片段的大小为1.03Mb。利用大白菜A基因组10个连锁群上均匀分布的100个InDel标记对其进行分子鉴定,初步确定了该易位系中甘蓝染色体片段位于大白菜5号染色体上。2.分别利用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射线对大白菜—结球甘蓝3号单体异附加系进行植株辐射,并对辐射后的植株进行游离小孢子培养,利用结球甘蓝C02连锁群相对于大白菜的特异InDel标记对获得的小孢子植株进行鉴定,从37个小孢子植株中筛选出8个具有结球甘蓝C02连锁群特异条带的植株。其中,1个来自30Gy辐射的植株,5个来自45Gy辐射的植株,2个来自60Gy辐射的植株。对8个具有甘蓝特异条带的植株进行减数分裂观察,结果显示这些植株中有4株染色体数为20条,初步确定这4株为添加结球甘蓝3号染色体片段的大白菜—结球甘蓝易位系,命名为AT3-24、AT3-45、AT3-47和AT3-54。3.用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射线对大白菜—结球甘蓝3号单体异附加系进行花粉辐射,并自交留种,对获得的M1植株进行InDel标记鉴定,从46个M1植株中筛选出5个具有结球甘蓝C02连锁群特异条带的植株,通过对其进行减数分裂观察,明确了其中3个植株的染色体数为20条,初步确定其为大白菜—结球甘蓝异源易位系,命名为AT3-4、AT3-23和AT3-39。对AT3-39后代进行InDel标记鉴定,22个M2植株中有17棵的扩增产物与结球甘蓝亲本相同,部分植株中无结球甘蓝特异标记,表明AT3-39为杂合易位系植株。4.以二倍体大白菜亲本‘85-1’和结球甘蓝亲本‘11-1’为对照,对AT3-11、AT3-45和AT3-54进行田间性状调查,结果显示营养生长阶段AT3-11与大白菜亲本‘85-1’无明显差异,AT3-45和AT3-54表现不结球;生殖生长阶段AT3-45和AT3-54表现出抽薹较晚、柱头明显低于花药,这些与结球甘蓝亲本‘11-1’性状相似。营养品质的鉴定结果表明,易位系材料的Vc含量均高于大白菜亲本。
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