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目的肝癌死亡原因主要为侵袭转移。肝癌侵袭转移可分为多个阶段,包括细胞间黏附下降、细胞外基质降解、肿瘤细胞迁移、外侵以及远处定植等环节。BVES是一个具有三次跨膜结构的黏附蛋白,研究发现其在维持上皮细胞完整性及调节细胞运动过程中具有重要作用,而这两方面也正是目前肿瘤转移研究的热点。最近有研究报道BVES对一些上皮来源肿瘤的发生发展具有重要作用,但具体的作用机制及上游调控因子还未阐明,BVES对肝癌的作用,尤其是肝癌细胞EMT的作用尚无报道。本实验首先研究BVES对肝癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用,结合我们研究小组之前关于促肿瘤因子Netrin-1的研究,进一步探讨Netrin-1与BVES的作用关系及可能的分子机制。方法应用qRT-PCR、Western blot及免疫组化方法检测21对肝癌手术标本癌及癌旁组织中BVES的表达。RT-PCR方法检测不同转移潜能肝癌细胞株中BVES的表达。构建针对BVES mRNA的siRNA(BVES siRNA)及阴性对照siRNA(Control siRNA)。在Huh7肝癌细胞中转染BVES干扰片段后,qRT-PCR和Western blot方法测定干扰效率及上皮细胞标志蛋白E钙粘素(E-cadherin)和间质细胞标志蛋白波形蛋白(Vimentin)的表达变化;qRT-PCR进一步检测Twist1、Snail1、MMP2/MMP9和IL-6的表达;观察肝癌细胞形态及细胞骨架改变;用Transwell检测抑制BVES后肝癌细胞迁移、侵袭能力变化。观测过表达Netrin-1对肝癌细胞BVES表达的影响。给予Netrin-1蛋白作用肝癌细胞观测其对肝癌细胞BVES表达的影响。Western blot检测Netrin-1蛋白对PI3K/Akt通路信号分子表达的作用,PI3K抑制剂LY294002预先处理肝癌细胞后探讨PI3K/Akt通路在Netrin-1对BVES表达调节中的作用。结果在21对病理学诊断为肝癌及癌旁手术标本中,14例癌旁组织BVESmRNA的表达明显高于癌组织,阳性率达66.7%,免疫组化证实BVES主要表达于细胞质及细胞膜。在不同转移潜能肝细胞及肝癌细胞中,随着转移潜能增加,BVES表达减少。在Huh-7肝癌细胞中干扰BVES后发现,肝癌细胞上皮标志蛋白E-cadherin减少68.20±0.72%(p <0.05),间质标志蛋白Vimentin增加3.71±0.93倍(p <0.05);形态学上观察到,干扰BVES后,Huh7肝癌细胞由椭圆形的上皮结构变为胞体狭长的间质细胞结构,细胞连接减少,鬼笔环肽检测到细胞骨架发生重排。细胞迁移实验结果显示,干扰BVES后迁移细胞数(382±12)个,较对照组(180±10)个明显增加(P<0.01);侵袭实验结果显示,干扰BVES后穿过基质胶的细胞数(300±15)个,较对照组(120±12)个明显增加(P<0.01),而24h细胞增殖无明显改变。同时发现,干扰BVES后,肝癌细胞中Twist1、Snail1、MMP2/MMP9及IL-6mRNA表达均增加。过表达Netrin-1及加入重组人Netrin-1蛋白后,Huh7肝癌细胞BVES在mRNA和蛋白水平表达均减少,且Akt磷酸化增加。抑制Netrin-1下游PI3K/Akt信号通路后,BVES表达可恢复。结论BVES可能与肝癌侵袭转移有关;其低表达具有促进肝癌细胞EMT的作用;肝癌细胞中BVES受Netrin-1调控,而PI3K/Akt信号通路可能在这个过程中具有重要作用。深入研究BVES在Netrin-1促进的肝癌细胞转移中的分子机制,可能为抑制肝癌转移寻找潜在干预靶点提供实验依据。