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新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是新生儿神经系统残疾的重要原因之一。及时诊断以及采用有效的治疗手段对提高存活率减少后遗症有重要意义。目前对其发病机制的分子生物学研究表明，缺氧缺血性脑损伤是多因素介导和参与的分子病理过程，诸多因素对病变的发生和发展起着阻抑或促进作用。目前研究认为，兴奋性氨基酸(EAA)及其受体尤其是N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)与缺氧缺血性脑损伤(Hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)密切相关，而70kDa热休克蛋白(HSP70)是缺氧缺血的敏感指标。神经节苷脂(ganglioside)是一种糖鞘脂，在神经系统中含量丰富。而单唾液酸四已糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)是哺乳类神经节苷脂的主要种类，它对神经细胞的分化、生长、轴浆转运和再生起着重要作用。但NMDAR、HSP70在新生儿缺氧缺血性脑病中的作用及GM1的脑保护作用的机制尚不清楚，本研究是通过观察新生鼠HIBD后脑内NMDAR、HSP70、病理学损伤的变化及应用GM1治疗后对其的影响，探讨新生大鼠HIBD时NMDAR、HSP70与脑损伤的关系及GM1脑保护作用机制。 第四军医大学硕士学位论文一 目的 研究排牛大阶缺玩缺血川山趴伤后海马CA 以N MADAR、NMDARllllRNA、11SP70、病刊Z学损伤的变化和 GMI对其的影l向。 方法 结扎7 Ill龄新生鼠左颈总动脉后，吸人80fill·L‘浓度氧2 h，出立HI＊0模型。①制备新生鼠缺氧缺血性脑损伤（未治疗组）模型。②制备GM治）1组棋型，脑缺氧缺血（iii）后每日腹腔注射 GM注射液。应川苏木素．伊红（HE）染色，DoKa Envision二步法抡疫组化染色及原位杂交的力‘法检测。新生鼠脑缺氧缺血后存活不同时IbJ脑河马组织NMADARINMDARllllANA、IISP70及病理学损伤的动态变化及GMI对其的z剔向。 结果： l、术经 GM处理组 1．INMDARI衣达。俏凸：①NRI 阳性性细胞的形态及分布：NRI主业分介于兰！胞哄及胞 浆，与NRI多七结合1，经＊＊B＼Z也攸纠I胞册丑 浆呈棕黄色：山于海马各区不同细胞层细胞形态不同所呈现的NRI阳性细胞形态亦不同。正常组及假手术组中阳性细胞较少以胞浆和膜着色为主。m纵NRI川性细胞【U显增多刃＊以＊Al 区【川显刃＊出现一定皮向细胞核首色U②NRI蛋151检汉结果二且 间差＊较：正常组与假手术全NRI正 似Z细胞的平均灰度值在各时问，。于无显著性差异，且表达较弱。HI组在缺血后Zh门90土12）有所上：升。在24卜（150土16）至妮h（1的土1＊ 7红下降，72 h（门1士18）达最千，5 d（152土 22）JIJ仍维持较｛水平，7 d olJ有所厂升，仍低于二常水平。有统计学意义（P＜0刀＄ l．2 NI＜11ill＜NA ）川人1人达。l，且泌c二 ＜一l＿） NIZllllRNAI S11们、Illj］W山／卜怎及多介二成熟的＊Rim＊＊A主要存在于细胞浆中，细胞核内有少虽的NRI。＊RN A的体。＿＊NA与应用地高辛标记的寡核甘酸探针结合后，＊＊B呈色，胞浆核脱呈休此色，人常川及＊干术字m厂N＊含至较少门1．行＊纠恻川。l多叶 叶1故原位杂交后呈色深浅不一，HI后NRlmRNA阳性细胞明显增多，匝以垃形胶质细胞为主，多数核着色甚至密集分布。②＊RlmKNA检测的时间差比较：正常组与假手术组 NRlmANA平均灰度无明显差异。HI组与正常组在NRI；nRNA 24达之问 ＊差异呈显著卜］i义，＊Jt丫 HI后 24h（147土18）至 3 第四军医大学硕士学位论文一72h（121土 20）之问，其表达之间的差异呈非常显著性怠义（P＝0．005）捉示：正常悄况下表达较少，HI后引起表达明jA增加，＿l，I回72h达诡低，持纸7d表达仍较低（156土 18） L3 NSP7O i白人达‘hs况：nSP70主翌分布于核脱及胞浆，‘＊NSP70多仇纠介后，经＊＊By色，攸核腆、胞浆呈体攸也 止常组及似【术组小NI性细胞较少，染色较弱，呈1级染色。 1．4鼠海马＊Al 区组织学改变：假手术组及正常对照组在各时间，。乐经HE染色未见明显缺血．损伤。M组在缺血后Zh无明显损伤改变，24h偶见神经细胞肿胀，细胞淡染，细胞数量稍有减少，48h除。。IW见上述表现外，。。］“见细胞部分坏死，锥体细胞嗜伊红变性，细胞松敝间隙扩大，72h上还现象进一步加重，sd时可见海马＊Al 区神经元大多数坏死，嗜伊红深染，周边部胶质细胞增生。川时尤明显改善，S八！。一个样本出现核山缩、深染，似乎忧示7））4亡）“4。。 二、GM处划组： 2．1＊RI阳性细胞表达，①＊RI阳性细胞的形态及分布与正常组及假乎术纵类似，较正常及似手术组数云计曾多，但与h1组比较叨孤减少。②川］－问差的比较：在缺氧缺血后各时段内 NR蛋白表达较 i组显著降低，但强于－IHfZ”力1人ZM假下水gll，／，Z Ill）n Zh们有下降，24h至 48h＿11升，72h达札峪；sd吕 仍较向 雾7d时下降，除Zh点外各日三 点均｛于＊1组罗 有统