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目的:研究NPY1R与OLFM1在ERα阳性乳腺癌中的功能,探讨两者表达水平与乳腺癌患者临床病理特征和生存期的关系。方法:基于GOBO基因组学在线数据库比较NPY1R与OLFM1在不同分子分型乳腺癌细胞系及患者中的表达差异,分析与乳腺癌患者生存期的关系。通过体外细胞实验,在ERα阳性乳腺癌细胞株MCF7中加入雌二醇E2增强ERα信号通路后,利用RT-qPCR和Western Blot实验分别检测NPY1R与OLFM1的mRNA和蛋白表达水平,验证ERα是否能够调控NPY1R和OLFM1的表达。采用siRNA干扰技术,利用WST-1实验,Transwell实验,ELISA实验和Western Blot实验,检测沉默NPY1R和OLFM1基因后对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。通过免疫组化实验并结合患者的临床病理学资料,分析NPY1R与OLFM1在不同类型乳腺癌患者中蛋白表达水平的差异、与临床病理特征的相关性以及生存期的关系。结果:1.NPY1R与ERα阳性乳腺癌GOBO基因组学在线数据库分析发现,NPY1R在三阴性型,HER2阳性型细胞系中表达较低,在部分ERα阳性型乳腺癌细胞系中表达较高(P<0.05)。NPY1R在ERα阳性型乳腺癌患者中的表达量高于其它分子分型的乳腺癌患者(P<0.01)。在所有患者和ERα阳性型乳腺癌患者中,NPY1R高表达组的10年无远端转移生存期低于低表达组(P<0.05)。体外细胞实验表明,E2的刺激上调了NPY1R的mRNA表达水平和蛋白表达水平。通过siRNA沉默NPY1R发现:细胞增殖和侵袭能力下降,细胞凋亡速度加快。组织芯片结果发现,NPY1R在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。进一步对比分析表达水平与临床病理指标(患者年龄、肿瘤部位、病理分级、淋巴结状态,T分期、AJCC临床分期)、分子分型指标(ERα、PR、HER2)、预后指标(S100、P53)、恶性程度相关指标(SMA、CK7、BCL-2、HCK)和转移相关指标(E-cadherin)之间的关系发现,NPY1R的表达水平仅与病理分级间的差异具有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现,病理分级、淋巴结状态、AJCC临床分期、ERα表达状态、P53表达状态和NPY1R表达状态是患者总生存期的影响因素。COX模型多因素分析发现,NPY1R表达状态、ERα表达状态和P53表达状态是影响总生存期的独立预后因素(P<0.05)。生存分析发现:(1)NPY1R高表达乳腺癌患者的10年总生存期低于NPY1R低表达患者(P<0.05)。(2)在年龄>50岁、ERα阳性型、临床2-3期或病理2-3级的乳腺癌患者中,NPY1R表达量越高,生存时间越短,但是差异无统计学意义(P>0.05)。(3)在淋巴结阳性表达的乳腺癌患者中,NPY1R表达量越高,生存时间越短(P<0.05)。2.OLFM1与ERα阳性乳腺癌GOBO基因组学在线数据库分析发现,OLFM1在三阴性型和HER2阳性型乳腺癌细胞系中表达较低,在ERα阳性型乳腺癌细胞系中表达较高(P<0.05),且在体外实验证实,E2能够上调OLFM1的mRNA表达水平和蛋白表达水平。进一步通过siRNA沉默OLFM1后发现:细胞增殖和侵袭能力下降,凋亡速度加快。进一步分析OLFM1的表达水平与乳腺癌患者临床指标间的关系发现:(1)OLFM1在乳腺癌组织和癌旁组织中的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而利用GOBO基因组学在线数据库分析发现,OLFM1的mRNA表达水平在ERα阳性型乳腺癌患者中高于其它分子分型的乳腺癌患者(P<0.01)。(2)将OLFM1表达水平与临床病理指标(患者年龄、肿瘤部位、病理分级、淋巴结状态,T分期、AJCC临床分期)、分子分型指标(ERα、PR、HER2)、预后指标(S100、P53)、恶性程度相关指标(SMA、CK7、BCL-2、HCK)和转移相关指标(E-cadherin)之间的差异进行分析,发现OLFM1的表达水平仅与病理分级和E-cadherin表达状态之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者总生存期的单因素分析结果表明,病理分级、淋巴结状态、AJCC临床分期、ER表达状态和P53表达状态是患者总生存期的影响因素(P<0.05)。COX模型多因素分析发现,OLFM1表达状态、ERα表达状态和P53表达状态是影响总生存期的独立预后因素(P<0.05)。GOBO基因组学在线数据库分析发现,在乳腺癌患者中,OLFM1高表达组的5年无远端转移生存期高于低表达组(P<0.05)。OLFM1的表达水平在乳腺癌患者亚组中的生存分析发现,在年龄>50岁、ERα阳性型或临床2-3期的乳腺癌患者中,OLFM1表达量越高,生存时间越短(P<0.05)。而在病理分级2-3级或淋巴结阳性表达的乳腺癌患者中,尽管OLFM1表达量越高生存时间越短,但是差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.ERα能够上调NPY1R与OLFM1的mRNA及蛋白表达水平。2.沉默NPY1R和OLFM1抑制MCF7细胞的增殖和侵袭能力,加速细胞凋亡。3.NPY1R表达状态、OLFM1表达状态、ERα表达状态和P53表达状态是影响乳腺癌患者总生存期的独立预后因素。4.在乳腺癌患者或淋巴结阳性表达的乳腺癌患者中,NPY1R的表达越高生存期越短。5.在ERα阳性乳腺癌患者、年龄>50岁的乳腺癌患者或处于临床2-3期的乳腺癌患者中,OLFM1的表达越高生存期越短。