论文部分内容阅读
以废弃物棉秆水解液中的木糖为原料,开展了木糖醇转化菌株的筛选,进行了菌株表达木糖还原酶的条件和转化木糖醇的研究,并对棉秸秆水解液的进行了脱毒处理和木糖醇转化的研究。结果如下:利用木糖作为主要碳源,获得了能够以木糖为主要碳源生长的菌株。利用TLC和HPLC法检测,从中筛选到了一株性能较为优良的转化木糖为木糖醇的菌株X-Xol-1。经过菌体形态和18SrDNA序列分析,该菌株鉴定为Candida lusitaniae,命名为Candida lusitaniae X-Xol-1,Genbank登录号为EU562180。研究了菌株的表达木糖还原酶条件。结果表明Candida lusitaniae X-Xol-1表达木糖还原酶的最适培养温度和pH分别为35℃和为5.5,最适氮源为酵母粉;镁离子和钾离子对木糖还原酶酶活有促进作用,最佳浓度分别为Mg2+ 0.25g/L和K+1.25g/L。菌株对木糖催化反应的米氏常数Kmxylose为0.179 mmol/L,最大反应速度Vmax为1.705 mmol/(L·min);对辅酶NADPH的米氏常数KmNADPH为0.573μmol/L,最大反应速度Vmax为3.163μmol/(L·min)。确定菌株的生长和发酵条件。结果表明生长与转化木糖的最佳pH和温度分别为5.0和35℃,接种量为5%,装液量为40%,生长转速为170rpm,转化转速为120rpm。最佳氮源为酵母粉,用量为0.5g/L。在木糖浓度为30g/L,发酵60h,木糖醇得率为69.76%,生产强度为0.35g/(L·h)。研究了葡萄糖对木糖醇转化的影响。结果表明:葡萄糖会抑制木糖醇的转化。当发酵液中同时存在葡萄糖和木糖时,菌株优先利用葡萄糖,只有当葡萄糖代谢完全时,才开始利用木糖。研究了Ca(OH)2、活性炭和活性白土对棉秆水解液的脱毒效果。结果表明:利用Ca(OH)2过中和到pH10.0,再用硫酸回调到pH5.5可获得最佳脱毒效果;活性炭对水解液脱毒最佳条件为,活性炭为固液比1%,pH5.5、70℃处理60min;活性白土最佳条件为温度30℃,水解液pH5.5,以0.5%的固液比处理40min。利用水解液驯化菌株C. lusitaniae X-Xol-1,提高该菌对棉秆水解液的适应性,使该菌的木糖醇转化率提高了22.47%。利用水解液发酵,木糖醇转化率低,仅为29.60%。浓缩水解液木糖醇转化率为42.51%,比未浓缩水解液高,但比以纯木糖为底物发酵低。