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猪轮状病毒(Procine Rotavirus,PRV)是幼畜病毒性腹泻的主要病原之一。鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)通过调节胃肠道粘膜免疫提高机体抗病毒能力而降低轮状病毒患病率、持续时间以及腹泻程度。树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是机体最主要也是最重要的抗原递呈细胞(Antigen-presenting cell,APC),在固有免疫与适应性免疫过程中发挥重要作用。通过LGG免疫后感染PRV小鼠DCs的分化成熟情况与对感染过程中细胞因子进行研究,有助于了解LGG抗PRV感染的免疫应答基质,从而为应用乳酸菌防治猪轮状病毒病提供理论指导。具体研究内容及结果如下:本研究将108只3-4周龄的BALB/c小鼠随机分为三组,分别为:LGG+PRV组、PBS+PRV组和PBS对照组:LGG+PRV组攻毒前7天每隔一天口服鼠李糖乳杆菌一次,浓度为100μL(106cfu)/只,第八天口服猪轮状病毒,浓度为200μL/只;PBS+PRV组攻毒前七天口服同计量的磷酸盐缓冲液(PBS),第八天口服猪轮状病毒,浓度为200μL/只;PBS组免疫攻毒期都口服PBS。观察小鼠体重变化状况,于24h,48h,72h,96h不同时间点进行如下指标的检测:(1)流式细胞术(FCM)检测小鼠MLN、脾脏中CD11c+CD11b-CD8α+、CD11c+CD11b+CD8α-、CD11c+B220+CD8α+、CD11c+B220+CD8α-DC亚群分化情况和MHC-Ⅱ,CD80、CD86、CD40共刺激因子的表达水平;(2)QRT-PCR检测小鼠MLN与小肠中TLR3、NF-kappaB、IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12以及IFN-γ的mRNA水平,(3)ELISA法检测IL-10和IFN-γ的含量变化。研究结果表明:(1)PRV感染后LGG+PRV组与PBS+PRV组DCs亚群分化不同,LGG+PRV组主要向CD11c+CD11b-CD8α+、CD11c+B220+CD8α+DC亚群分化(P<0.05),PBS+PRV组主要向CD11c+CD11b+CD8α-、CD11c+B220+CD8α-DC亚群分化(P<0.05)。说明鼠李糖乳杆菌免疫后促进机体CD8α+DCs的分化,进而高效的提呈抗原,并活化初始T淋巴细胞的免疫应答,激活适应性免疫。并且LGG+PRV组DCs高表达MHC-Ⅱ和CD80、CD86、CD40,由其48h时MHC-Ⅱ+DCs的极显著表达(P<0.01)说明LGG免疫后促进淋巴器官中DCs成熟,诱导T细胞进行免疫识别促进T细胞免疫反应,激活适应性免疫。(2)QRT-PCR检测结果显示LGG+PRV组增加TLR3、NF-κB、IL-12、IL-10、IL-6、TNF-α、IFN-γmRNA的表达,48h-72h时TLR3、NF-κB、IL-12、TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平差异显著(P<0.05)。PBS+PRV组也呈增加趋势,其中IL-10、IL-6表达量显著(P<0.05),但IFN-γ的mRNA表达水平呈降低趋势。说明LGG免疫后感染病毒时促进机体分泌TLR3、NF-κB和其他细胞因子,尤其是炎性细胞因子,从而激活TLR3与NF-κB通路增强机体固有免疫反应,介导适应性免疫发生白细胞混合反应,并发生Th1/Th2偏振反应,避免对机体的不利损伤。(3)ELISA检测IL-10、IFN-γ的表达水平进一步说明LGG抗PRV感染时主要调节Th1型及炎性细胞因子的分泌,促进免疫应答以抑制和缓解病毒感染。以上研究结果表明LGG促进DCs分化与成熟,同时分泌TLR3、NF-κB及多种细胞因子,促进固有免疫和适应性免疫两方面的免疫应答,从而抑制和缓解病毒感染。