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目的通过检测DLBCL患者肿瘤石蜡组织及DLBCL细胞系CRL-2630中miR-21的表达水平并探讨其与DLBCL患者临床特征之间的关系,以为DLBCL的临床诊断及预后判断提供信息。通过下调DLBCL细胞系CRL-2630的miR-21表达水平判断其对肿瘤细胞凋亡的影响,探讨miR-21能否成为DLBCL基因治疗的侯选靶点。最后对肿瘤组织及肿瘤细胞中对miR-21与PTEN的关系进行研究,进一步探讨其致癌机制。方法课题分两部分进行：第一部分采用Real time RT-PCR方法检测26例DLBCL患者肿瘤石蜡组织和10名正常淋巴结对照组中miR-21表达；弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系CRL-2630与正常对照组4例正常人外周血淋巴细胞miR-21表达水平测定,并对肿瘤石蜡组织miR-21水平与患者临床特征进行临床意义分析。第二部分培养DLBCL细胞系CRL-2630,采用电穿孔方法转染miR-21反义寡核苷酸(AMO-21)抑制miR-21,Real time RT-PCR方法检测抑制率,使用Annexin-V法流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡率变化。对26例DLBCL患者肿瘤石蜡组织及10名正常对照组采用免疫组织化学法检测PTEN表达,Western Blot检测肿瘤细胞系转染前后PTEN蛋白表达差别。结果(1)miR-21在DLBCL肿瘤石蜡组织中相对表达量(-△△Ct)为2.70(0.13,5.25)高于正常淋巴结对照组-0.34(-1.51,1.39),是对照组8.45倍,差异有统计学意义(p<0.05)。miR-21在DLBCL细胞系CRL-2630中的表达较正常对照组升高。miR-21高表达与DLBCL血清LDH呈正相关(p<0.05),Ⅲ/IV期患者miR-21表达水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期患者(p<0.05),与GCB/ABC临床亚型无关(p>0.05)。(2)CRL-2630细胞系转染AMO-21后48小时肿瘤细胞凋亡水平(16.25%±1.60%)较阴性对照组肿瘤细胞凋亡水平(10.30%±1.49%)增高(p<0.05),免疫组化法检测肿瘤标本发现26例DLBCL中有6例PTEN阳性(23%),DLBCL患者肿瘤组织中miR-21表达水平与PTEN蛋白表达呈负相关,Western Blot检测转染后肿瘤细胞PTEN蛋白表达升高。结论(1)miR-21在DLBCL中表达升高,miR-21过表达可以被认为是淋巴瘤诊断的分子标志,可以通过Real time RT-PCR方法检测其表达水平,协助DLBCL的临床诊断。(2)miR-21表达和LDH水平及临床分期成正相关,与病理分型没有相关性,其高表达可提示DLBCL患者的不良预后。转染AMO-21可以有效抑制miR-21的表达,增加抑癌基因PTEN蛋白表达,Pten基因可能是miR-21作用的靶基因。(3)转染AMO-21有效抑制miR-21表达后,可以增加肿瘤细胞凋亡率,反义miRNA寡聚核苷酸转染技术是一项有效的基因沉默技术,具有临床应用前景,miR-21可成为DLBCL基因治疗的侯选靶点。