论文部分内容阅读
本项研究工作是在前期工作的基础上开展的。本实验室阎爱华等[1]构建了叶锈菌小种366侵染小麦近等基因系TcLr19早期不同时间点的SSH文库。从中筛选出的TaE3 EST在叶锈菌侵染后16h高量表达。已有研究表明,在高温或低温胁迫下,植物某些蛋白会发生错误折叠,如果这些蛋白积累就易引起病变。具有E3活性的AtCHIP蛋白就是通过调控Hsp70、Hsp90蛋白的表达,重叠修复或降解某些异常蛋白,减少了环境胁迫对植株的损害[2]。本试验以小麦近等基因系TcLr19和叶锈菌小种366为材料,利用RT-PCR技术克隆得到TaE3基因的全长,通过实时荧光定量PCR和Western Blotting技术检测小麦被叶锈菌侵染后不同时间点的TaE3表达特征,并通过构建真核表达载体,利用农杆菌转化技术转化拟南芥,得到过表达TaE3基因的拟南芥纯合体植株。获得的主要结果如下:1.利用RT-PCR技术从小麦幼苗叶片中克隆获得了TaE3基因的全长。.2.构建了原核表达载体,获得大量TaE3融合表达蛋白,通过免疫新西兰兔,获得高效价的兔抗血清,并证明该血清与TaE3融合蛋白呈特异结合。3.通过qRT-PCR和Western Blotting技术检测了TaE3基因在小麦被叶锈菌侵染后不同时间点的表达量变化。结果表明,该基因在RNA水平的表达量在8 h之前几乎没有变化,但在16 h表达量很高且达到峰值;在蛋白水平的表达量在8 h开始增加,16 h表达量最高,而在24 h又有所回落,48h接近对照。初步表明该基因可能参与了小麦抵抗叶锈菌侵染的防卫反应表达过程。4.构建了pCAMBIA1300-35S:: TaE3-eYFP的真核表达载体,运用农杆菌转化拟南芥技术获得TaE3基因的过表达纯合体植株。以上结果为进一步研究和探讨TaE3在小麦与叶锈菌互作过程中的作用及其机制奠定了试验基础。