【摘 要】
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核酸疫苗因有诸多优点已经成为当前疫苗研制领域的研究热点.我们尝试从副溶血弧菌鞭毛丝基因和鞭毛蛋白基因入手,研制其核酸疫苗,本文报道这一研究的前期结果.根据副溶血弧菌
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核酸疫苗因有诸多优点已经成为当前疫苗研制领域的研究热点.我们尝试从副溶血弧菌鞭毛丝基因和鞭毛蛋白基因入手,研制其核酸疫苗,本文报道这一研究的前期结果.根据副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)野生型菌株BB22极鞭毛蛋白FlaⅠ基因cDNA序列,通过合理的引物设计与合成、链延伸反应、PCR反应和其它分子生物学技术,合成出FlaⅠ基因全长片段,并将其克隆至pMDl8-T载体质粒上,序列分析和酶切鉴定显示基因得到正确的合成和克隆.用ClaⅠ/EcoRⅠ双酶切质粒pMDl8-FlaⅠ,回收目的基因片段,插入到真核细胞表达载体pIRESneo同样经ClaⅠ/EcoRⅠ切开的窗口中,将FlaⅠ克隆到pIRESneo中,获得有意义的重组质粒pIRESneo-FlaⅠ.以绿色荧光蛋白GFP基因作报告基因,在相同的实验条件下,用磷酸钙介导的贴壁细胞转染方法和DEAE-葡聚糖法方法,使pIRES-GFP和plRES-FlaⅠ平行转染COS-7细胞,pIRES-GFP和pIRES-FlaⅠ成功地转染了细胞并获得了表达.这些工作为副溶血弧菌核酸疫苗的研制奠定了基础.
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