疟疾是一种严重威胁全球公共卫生的蚊媒传染病,而间日疟原虫（P.vivax）是分布范围最广的感染人类的疟原虫种。P.vivax的宿主网织红细胞（Ret）嗜性导致的体外连续培养系统的缺乏,以及对间日疟临床症状严重程度的低估,使得间日疟疫苗研发进展缓慢。鉴于目前没有可用的有效疫苗,因而,迫切需要确定潜在的疫苗靶点。疟疾相关临床症状均发生在红内期感染阶段,而裂殖子表面表达的疟原虫配体参与入侵红细胞（RBC）,因此,这些配体被认为是药物和疫苗开发的靶点。我们之前的研究表明,P.vivax裂殖子表面蛋白1旁系同源物（Pv MSP1P）是一种与P.vivax入侵相关的RBC结合蛋白,其C端19 k Da片段（Pv MSP1P-19）具有很强的RBC结合能力,但其介导的裂殖子顶端与RBC结合的分子基础尚待探索。本研究旨在鉴定并表征Pv MSP1P-19结合的人RBC及Ret表面受体,并初步探讨Pv MSP1P-19与其受体的相互作用在疟原虫入侵过程中的功能,为了解P.vivax的潜在入侵机制提供科学依据,也为间日疟疫苗研发策略提供新思路。本研究主要内容如下:1.PvMSP1P-19结合的潜在人RBC及Ret膜受体的鉴定:密码子优化并合成pvmsp1p-19及与其高度同源的食蟹猴疟原虫（pc）pcmsp1p-19基因。PCR扩增msp1p-19基因并使用In-Fusion技术构建原核质粒p ET32a-MSP1P-19及真核质粒p EGFP-HSVg D1-MSP1P-19。将p EGFP-HSVg D1-MSP1P-19转染至HEK293T细胞使MSP1P-19蛋白在细胞表面表达。利用大肠杆菌原核表达系统表达MSP1P-19蛋白。纯化MSP1P-19可溶蛋白,并免疫小鼠制备其多抗血清用于后续实验。基于HEK293T细胞的花环实验表明,MSP1P-19有Ret结合偏好性。通过Percoll密度梯度离心法富集脐带血中的Ret,并采用低渗法提取RBC及Ret膜。提取新鲜可溶的RBC及Ret膜蛋白后,采用串联亲和纯化和液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术筛选与Pv MSP1P-19结合的RBC及Ret膜蛋白。结果表明,Band 3和CD71分别是MSP1P-19结合的潜在人RBC及Ret膜受体。2.MSP1P-19与Band 3及CD71相互作用的表征:基于LC-MS的结果,克隆、表达及纯化Band 3胞外环区（Band 3-L4、L5、L6）及CD71的C端胞外域（ECD）。通过Flag-pull down及ELISA筛选MSP1P-19结合的Band 3胞外环区,结果表明Band 3与Pv MSP1P-19及Pc MSP1P-19结合的关键区域均为loop 5。合成Band 3-P5多肽,通过ELISA进行竞争性结合分析和抗体抑制分析,结果表明MSP1P-19与Band 3-L5特异性结合。此外,通过pull down、ELISA及表面等离子共振实验等一系列生化分析方法,表明MSP1P-19与的CD71-ECD特异性结合,结合亲和力为3.55×10-5M,且MSP1P-19能够识别Ret膜中天然全长CD71。最后,通过检测与未处理或酶处理的RBC的结合以研究MSP1P-19的RBC受体特异性,结果表明MSP1P-19与人RBC的结合对糜蛋白酶敏感,且MSP1P-19通过Band 3的糜蛋白酶敏感的～40 k Da片段与人RBC结合。此外,初步探究MSP1P-19与Band 3及CD71的相互作用在Ret结合及疟原虫入侵中的功能。通过花环实验检测MSP1P-19、Band 3-P5及CD71-ECD多抗血清对MSP1P-19与Ret结合的影响,结果表明它们均可有效抑制MSP1P-19与Ret结合。通过体外入侵实验检测MSP1P-19对恶性疟原虫（P.falciparum）入侵RBC的抑制能力,结果表明MSP1P-19蛋白能以浓度依赖性方式抑制P.falciparum体外入侵。综上所述,得出以下结论:揭示了MSP1P-19与Band 3及CD71的相互作用在裂殖子入侵中的重要作用,为进一步了解P.vivax入侵Ret的机制提供理论依据,并为P.vivax疫苗研发策略提供新思路。