论文部分内容阅读
随着生活水平的提高,糖尿病己成为严重危害人类健康的慢性疾病,其中,2型糖尿病患者达到90%以上。药食两用植物具有安全性高、生物活性突出等优点,因而从药食两用植物资源中寻找具有降血糖作用的功能性因子用于改善2型糖尿病,具有重大的社会经济效益。辣木叶富含多种生物活性物质,以辣木叶或辣木叶提取物为核心原料,开发具有促进健康作用的功能性食品成为研究趋势。本文采用16种提取方法制备辣木叶提取物,研究不同提取方法对提取物物质组成及抗氧化活性的影响。以高脂饲料结合链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠为模式生物,研究辣木叶提取物及其多糖、小分子组分在体内降血糖作用,并对辣木叶提取物中降糖功效因子进行结构解析,为具有辅助降血糖功能的健康食品开发以及辣木叶精深加工提供理论及方法指导。主要研究内容及结论如下:(1)采用16种不同的提取方法,包括水/乙醇提取(高温水提取、中温水提取、超声辅助水提取、超声辅助乙醇提取)、酶法提取(胰酶、木瓜蛋白酶、Ns37071蛋白酶、复合蛋白酶)、酶法耦合乙醇提取、酶解提取后残渣超声辅助乙醇提取法制备辣木叶提取物;通过对比研究不同提取方法对辣木叶提取物中蛋白(水解蛋白)、糖类、多酚类物质含量及抗氧化活性的影响,有针对性定向提取辣木叶中抗氧化活性成分。结果表明:采用酶法和酶法耦合乙醇提取法,可以制备得到蛋白(水解蛋白)、糖类和多酚类物质含量高且抗氧化活性强的辣木叶提取物。采用Ns37071蛋白酶、胰酶时,所得辣木叶提取物蛋白、糖类、多酚类物质提取率最高,抗氧化活性最强。蛋白(水解蛋白)以及糖类物质对辣木叶提取物抗氧化活性的贡献大于多酚类物质,蛋白(水解蛋白)以及糖类物质是辣木叶提取物发挥抗氧化活性重要的物质基础。(2)采用胰酶酶解辣木叶,制备得到富酚富肽且富含糖类物质的辣木叶提取物(MLE)。利用截留分子量为10 kDa的超滤膜对MLE进行分级,得到辣木叶多糖组分及辣木叶小分子组分。通过高脂饲料结合STZ建立2型糖尿病大鼠模型,研究MLE及其分级组分对2型糖尿病的改善作用,并针对MLE及具有强降血糖活性的组分进一步探讨其可能的降血糖作用机制。结果表明:辣木叶提取物、辣木叶多糖组分、辣木叶小分子组分均能降低2型糖尿病大鼠空腹血糖与口服糖耐量,改善胰岛素抵抗,对大鼠2型糖尿病的改善作用从强到弱依次为:辣木叶多糖组分>辣木叶小分子组分>辣木叶提取物。辣木叶多糖组分降血糖活性可与二甲双胍相媲美,是辣木叶提取物中重要的降血糖功能性因子。辣木叶多糖组分通过改善机体葡萄糖耐受量,调控机体胰岛素抵抗,促进肝糖原合成,抑制肝糖原分解,拮抗机体氧化应激,调控机体脂质代谢以及保护并修复胰岛组织有效改善大鼠2型糖尿病。(3)采用醇沉、脱蛋白脱色及DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析法对辣木叶多糖组分进行分离纯化,分离得到4种酸性多糖(MLP-1、MLP-2、MLP-3及MLP-4),利用红外光谱、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生-高效液相色谱、高效凝胶渗透色谱、扫描电镜以及甲基化-气相色谱质谱对其结构进行解析。结果表明:4种辣木叶酸性多糖均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖组成,以半乳糖及阿拉伯糖构成骨架。其中,MLP-1是一种低分子量、低粘度、表面呈平坦光滑片状、以→3)Galp(1→构成主链,→5)Araf(1→及→3,6)Galp(1→含量高的呈紧密网格结构的杂多糖;MLP-2是一种高分子量、低粘度、表面呈多孔网状、以→3)Galp(1→构成主链,→5)Araf(1→含量较高的呈双主链网格结构的杂多糖;MLP-3是一种高分子量、低粘度、表面呈不规则颗粒凸起片状、以→3)Galp(1→构成主链,→3)Araf(1→含量较高的呈“树枝”状分支结构的杂多糖;MLP-4是一种高分子量、低粘度、表面呈不规则颗粒团状、以→3)Galp(1→构成主链,→3)Rhap(1→含量较高的呈呈双主链网格结构的杂多糖。采用酶法制备的辣木叶多糖具有粘度低、抗氧化,降血糖,降血脂活性好的特点,可作为功能性因子用于辅助降血糖健康食品的开发。