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卵泡抑制素(follistatin, FST)是一种单链糖蛋白,是从卵泡液中分离获得的,也称为性激素抑制蛋白。FST具有多种生物学功能,其中FST能与肌肉抑制素(MSTN)结合形成二聚体,抑制MSTN与受体结合,从而调节肌肉的生长发育。为了研究FST基因对家畜骨骼肌细胞生长发育的作用机制,本研究在骨骼肌细胞中特异性高表达FST基因,探讨FST过表达对绵羊肌源性细胞生长发育和相关基因表达的影响。我们首先利用脂质体介导的方法分别将骨骼肌特异表达FST的真核表达载体PCFCDs-red和PSPFCDs-red转染到骨骼肌卫星细胞和肌管细胞中,获得特异表达目的基因的转基因细胞系,然后分析转基因细胞的生长状况,并通过流式细胞检测、实时定量PCR及蛋白免疫印记等方法研究目的基因及其相关基因的表达水平,从而获得高效稳定的转基因细胞系,为制备转基因动物提供细胞模型。1.骨骼肌特异表达载体转染绵羊骨骼肌卫星细胞并诱导为成肌细胞利用脂质体介导的方法将骨骼肌特异性载体转染到绵羊骨骼肌卫星细胞,通过G418和红色荧光蛋白双筛选获得转基因细胞阳性克隆。扩大培养转基因细胞,通过体外诱导培养获得转基因肌管细胞。选取阳性转基因肌卫星细胞和肌管细胞绘制生长曲线并对转基因阳性细胞的细胞周期和细胞体积进行分析,结果表明筛选出的转基因细胞生长正常,其生长趋势与非转基因细胞相似；转基因骨骼肌卫星细胞增殖速度高于转基因胎儿成纤维细胞；流式细胞分析结果表明75%以上转基因细胞系均处于G0/G1期,具有单一峰值、细胞的整倍性好。2.FST基因对绵羊骨骼肌细胞发育相关基因表达的影响对获得的转基因细胞分别通过实时定量PCR和Western Blotting等方法检测目的基因和相关基因的表达情况。结果表明：转基因骨骼肌细胞和转基因肌管细胞中FST的mRNA及蛋白表达水平相比未转基因细胞均有所升高,转基因胎儿成纤维细胞中FST表达量没有变化；证实我们构建的含有骨骼肌特异性启动子SP及α-actin的真核表达载体能够有效启动FST目的基因,使其在骨骼肌卫星细胞和肌管细胞中高表达。其中,转PSPFCDs-red的转基因细胞中FST的表达水平比转PCFCDs-red细胞系高,说明SP启动子的启动效率高于α-actin。在对肌肉发育相关基因的研究中发现,肌源性细胞中FST的上调可以引起MSTN基因在RNA转录水平的提高,但MSTN蛋白水平没有明显变化。IGF-I、GH和RHEB的转录在FST高表达后也有变化,但没有明显规律。