蓝光对海带配子体发育的影响及其机理的研究

来源 :中国科学院海洋研究所 | 被引量 : 5次 | 上传用户:xutao6310794
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光对海带配子体的生长和发育具有显著影响.本研究使用单一波长的蓝光(470 nm)及红光(660 nm)作为光源,分析了光强和光质对海带(Laminaria japonica)配子体生长发育的影响情况.孢子分别采自2003年的9月及2004年的4月、5月和7月.蓝光光照强度分别为73.90μmol photons·m<'-2>·s<'-1>、24.47 μmolphotons·m<'-2>·s<'-1>和2.18 μmol photons·m<'-2>·s<'-1>,红光光照强度分别为25.60 μmolphotons·m<'-2>·s<'-1>和3.77 μmol photons·m<'-2>·s<'-1>,白炽光强度是24.24 μmolphotons·m<'-2>·s<'-1>.实验观察发现,胚孢子的萌发不依赖于光质与光强,但配子体的生长随蓝光及红光强度的增加而加快,蓝光的效应大于红光.在高强度的蓝光下(73.90 μmol photons·m<'-2>·s<'-1>),四月份采集的孢子萌发而来的雌、雄配子体分别产生卵子和精子,然后受精并发育为幼孢子体;但五月、七月及九月的孢子萌发所形成的配子体依然行营养生长,不形成卵囊和精子囊.在蓝光、红光和白炽光下,配子体都具有营养生长方式;在低强度的蓝光或者红光中,配子体的生长发育处于停滞状态.这可能与孢子囊成熟的季节有关,初步推断,季节影响配子体对光质的反应规范.此外,配子体的受精依赖于蓝光,只有当蓝光照射达到一定强度时,才能产生诱导效应.这间接证明海带配子体中,可能存在类似隐花色素或者phototropin的蓝光受体.采用基因克隆技术,对海带配子体的基因组DNA和cDNA进行了PCR扩增,旨在筛选海带配子体与蓝光诱导发育相关的基因.根据已知的高等植物、蕨类和绿藻的蓝光受体的序列设计了一对简并引物,用海带配子体基因组DNA为模板,进行了PCR扩增.扩增得到两条带,分别在1000 bp和500 bp左右.将约1000 bp的DNA转化、克隆并测序,所得序列与已知的蓝光受体基因序列不一致,再次设计引物,进行深入研究.在有效的配子体总RNA提取方法基础上,运用另一对引物,进行了RT-PCR扩增,得到一条约400 bp的带,DNA回收后连接T载体未能成功.
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