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目前,大环内酯类和氨基糖苷类抗生素在畜牧生产中被广泛使用,但是由于这两类兽药在畜禽饲养过程中存在滥用、误用、不遵守休药期等现象,导致动物源性食品中兽药残留超标,影响消费者健康。因此,研发动物源性食品中兽药残留快速确证检测技术具有重大意义。本研究建立了一种基于体外孵育结合液相色谱-四级杆-飞行时间质谱的新型非靶向筛选方法,确证分析了鸡肝微粒体中红霉素和克拉霉素及其代谢物,并通过研发改进的QuEChERS和SPE样品前处理技术结合液相色谱-串联质谱方法测定了畜禽可食性组织中2种大环内酯类及其代谢物和4种氨基糖苷类抗生素残留,为动物源性食品中大环内酯类和氨基糖苷类抗生素残留监测和检测标准的制定提供了科学依据。主要研究内容和结果如下:（1）通过体外孵育结合液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）首次确证分析了鸡肝微粒体中红霉素（ERY）和克拉霉素（CLA）及其代谢物。孵育系统（100μL）包含65μL磷酸钾缓冲液（0.1M,pH7.4）、20μL鸡肝微粒体（5mg/mL）、5 μL药物（20 μM）和10μL NADPH（10 mM）。在37 ℃下预孵育5 min后,通过加入10μLNADPH（10mM）溶液启动孵育反应。孵育60min后,用100 μL冰冷的乙腈含有1μg/mL内标（IS）（CLA或ERY）淬灭。样品通过超声、涡旋振荡、离心后,然后通过LC-Q-TOF-MS检测。结果发现ERY在鸡肝微粒体中能够代谢生成N-去甲基红霉素A（N-D-ERY）,而CLA不能够生成N-去甲基克拉霉素,并获得了红霉素、克拉霉素和N-去甲基红霉素A的特征碎片离子信息,为高分辨质谱的兽药精确质量数数据库提供了目标化合物的质谱信息,为研发非靶向筛选方法检测动物源性食品中红霉素、克拉霉素和N-去甲基红霉素A残留提供了技术支撑。与低分辨质谱技术相比,LC-Q-TOF-MS检测技术具有更强的定性确证能力。本研究首次证实了红霉素在鸡肝微粒体中能够生成主要代谢物N-去甲基红霉素A,为后续研究动物源性食品中大环内酯类抗生素及其代谢物残留监测提供了科学依据。（2）建立了一种改进的QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）测定鸡蛋和鸡组织中ERY、CLA和N-D-ERY残留的确证分析方法。样品采用80%乙腈水溶液提取,Cleanert MAS-Q小柱净化,通过UHPLC-MS/MS检测分析。流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,采用梯度洗脱程序和Waters ACQUITY UPLC BEH C18 柱(2.1 mm×50 mm,1.7（μm）来分离 ERY、CLA 和 N-D-ERY,流速为 0.4 mL/min。采用罗红霉素作为内标,在0.2-30 ng/mL浓度范围内,线性关系良好,决定系数R2均高于0.9961。在2、20和200 μg/kg三个浓度添加水平下,方法回收率为87.78%-104.22%,相对标准偏差（RSD）均不超过6.83%,日内RSD和日间RSD均低于7.10%,表明方法的重复性和重现性良好。鸡蛋和鸡组织中ERY、CLA和N-D-ERY的检测限和定量限分别为0.5 μg/kg和2μg/kg。该方法将QuEChERS技术与UHPLC-MS/MS结合,实现了只需—次前处理和检测,即可对鸡蛋和鸡组织中ERY、CLA和N-D-ERY残留进行准确的定性和定量检测。（3）建立了一种改进的QuEChERS结合超高效液相色谱-串联四极杆/轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q/Orbitrap-MS）测定猪、牛和羊肌肉中ERY、CLA和N-D-ERY残留的确证分析方法。样品采用80%乙腈水溶液提取,CleanertMAS-Q小柱净化,通过UHPLC-Q/Orbitrap-MS检测分析。优化了液相色谱和质谱检测条件,获得了良好的分离度和灵敏度。采用罗红霉素作为内标,在0.2-30 ng/mL浓度范围内,线性关系良好,决定系数R2均高于0.9983。在2、20和200 μg/kg三个浓度添加水平下,方法回收率为88.96%-101.76%,RSD不超过5.95%,日内RSD均在2.64%-6.65%之间,日间RSD均在3.08%-6.38%之间。方法检测限为0.4 μg/kg,定量限为2μg/kg,能够满足兽药残留检测的要求。QuEChERS-UHPLC-Q/Orbitrap-MS方法缩短了整个样品的前处理时间和检测时间,可以批量处理样品,提高了工作效率,同时还提高了方法的灵敏度、重复性和重现性。（4）建立了一种改进的SPE样品前处理技术结合UHPLC-MS/MS测定畜禽可食性组织中庆大霉素（GEN）、奈替米星（NET）、西索米星（SIS）和卡那霉素（KAN）残留的确证分析方法。样品采用5%三氯乙酸溶液（含0.4 mM EDTA和10 mM乙酸铵）提取,Oasis PRiMEHLB柱（6mL/200mg）净化,甲酸-乙腈-2 mM乙酸铵水溶液（10:5:85,v/v/v）洗脱,通过 UHPLC-MS/MS 检测分析。采用 SiELC Obelisc R（2.1 mm×50mm,100（?）,5μm）作为色谱柱,柱温35℃,流速为0.3 mL/min,流动相为1%甲酸水溶液（含2 mM乙酸铵）-90%乙腈水,梯度洗脱。在10-1000 ng/mL浓度范围内,线性关系良好,决定系数R2均高于0.9972。在20、100和200 μg/kg三个浓度添加水平下,方法的回收率为78.90%-105.52%,并且日内RSD和日间RSD均低于8.31%,表明方法的重复性和重现性良好。畜禽可食性组织中GEN、NET、SIS和KAN的检测限和定量限分别为5 μg/kg和10μg/kg。该方法将改进的SPE技术与UHPLC-MS/MS结合,实现了只需一次前处理和检测,即可对鸡蛋、鸡组织和猪、牛和羊肌肉中GEN、NET、SIS和KAN残留进行准确的定性和定量分析。综上所述,本研究首先建立了 LC-Q-TOF-MS方法确证分析了鸡肝微粒体中ERY和CLA及其代谢物,证实了 ERY在鸡肝微粒体中能够生成主要代谢物N-D-ERY。此外,本研究通过对样品前处理技术及色谱、质谱条件的优化,建立了畜禽可食性组织中2种大环内酯类及其代谢物和4种氨基糖苷类抗生素残留准确定性和定量的QuEChERS-UHPLC-MS/MS、QuEChERS-UHPLC-Q/Orbitrap-MS 和 SPE-UHPLC-MS/MS确证分析方法,方法性能指标均符合兽药残留检测的要求。上述三种确证分析方法快速、简便、灵敏度高,可应用于畜禽可食性组织中大环内酯类及其代谢物和氨基糖苷类抗生素残留的日常监测。