草鱼CNBP、eIF-5A的克隆、组织表达及进化分析

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从草鱼(Ctenopharyngodon idella)肝肾cDNA文库中克隆到草鱼细胞核酸结合蛋白和真核翻译起始因SA。 草鱼细胞核酸结合蛋白(Cellular nucleic acid-binding protein,CNBP)全长cDNA为1948bp。其中5’端非翻译区33bp,3’非翻译区1423bp。开放阅读框为492bp,编码163个氨基酸。草鱼CNBP含有7个保守CCHC型锌指结构、核定位信号区和RGG框,与其他鱼类的同源性很高。与人及其他脊椎动物的相比,草鱼CNBP在25处氨基酸位点发生替换,其中在第3个锌指中的第5个氨基酸残基由Gly变成在鱼类中保守存在的His,另外在第1锌指和第2锌指结构间,缺失6~14个氨基酸残基。但这种结构的差异还不足以产生新的功能,因为适应性进化分析显示细胞核酸结合蛋白没有经历正达尔文选择《ω≤1)。RT-PCR的实验结果表明,在正常草鱼肝、肠、肾、脾、心、肌肉、鳃和脑8种组织中,CNBP在草鱼心脏中表达比较显著,其次是脑、鳃、肌肉,在肾中也有微弱表达。 草鱼真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF-5A)全长cDNA为2249bp,其中包含5’非编码区41bp,3’非编码区1743bp,其编码的eIF-5A由155个氨基酸残基组成,分子量为16.856ku,等电点pI为5.18。草鱼eIF-5A蛋白的N端含有eIF-5A家族共有的羧腐胺赖氨酸,在蛋白C端包含一段富含亮氨酸的结构域。草鱼eIF-5A与人及其他动物的eIF-5A具有较高的同源性,只有少数氨基酸残基发生替换。适应性进化分析也表明eIF-5A不但具有结构的保守性还具有功能的保守性。eIF-5A在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝脏、肠、肾等组织中恒量表达,并且其表达不因PolyI:C的诱导而发生变化。
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