本文将新型的混合模式吸附层析应用于猪血免疫球蛋白的分离纯化。混合模式吸附层析结合了静电与疏水相互作用,吸附容量大,具有非盐依赖的吸附特性,在高盐和低盐条件下都可以高效吸附目标蛋白。一般可以通过调节pH,改变蛋白质和/或吸附剂的所带电荷,利用静电排斥作用协助洗脱。我国年产猪血100多万吨,目前大部分废弃,造成资源的严重浪费和环境污染。猪血中富含蛋白质,其中免疫球蛋白高达2%,具有抗菌、抗病毒等生物活性。开发合适的分离工艺,实现猪血蛋白的高效经济分离,变废为宝,具有重要的意义。首先考察了不同沉淀法分离猪血浆中的纤维蛋白原,包括冻融法、乙醇法、聚乙二醇法和硫酸铵法,比较发现硫酸铵法简单易行,成本低,周期短,分离纤维蛋白原效果好。无需调节血浆pH,用20%饱和度的硫酸铵溶液沉淀分离猪血浆中的纤维蛋白原,离心后的上清液中富含免疫球蛋白,便于后续分离。考察了商品混合模式吸附介质MEP-HyperCel对猪血免疫球蛋白的吸附性能,包括静态吸附平衡和吸附动力学,研究了pH和盐浓度对吸附的影响,确定了合适的上样和洗脱条件,从硫酸铵沉淀的上清液中直接分离免疫球蛋白,纯度达到77.4%,得率为11.5mg/ml血浆。进一步研究了实验室自制的3种亲硫性混合模式吸附剂(Cell-TuC-DVS-MMI,Cell-TuC-DVS-MEP和Cell-TuC-DVS-MBI)对猪血免疫球蛋白的吸附性能。研究发现,pH是影响吸附的关键因素,Cell-TuC-DVS-MMI吸附容量比较大,对pH敏感,吸附选择性较好,适合于分离猪血免疫球蛋白。优化了层析分离条件,以硫酸铵沉淀的上清液为料液,pH5平衡上样,pH7洗脱去除杂蛋白,pH3.8洗脱得到猪血免疫球蛋白,电泳分析纯度达到94.3%,纯化倍数为5.6。本文实现了硫酸铵盐析和混合模式吸附层析的有机结合,利用硫酸铵沉淀分离纤维蛋白原,沉淀上清液无需处理,直接利用混合模式吸附层析分离,得到纯度较高的猪血免疫球蛋白。本文工作为猪血资源的综合开发利用提供了新方法。