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炭疽属于造成死亡率很高的一类急性的人畜共患传染病。炭疽杆菌常常被用作生化武器,对人类生存和生命安全存在威胁,因此炭疽杆菌的研究仍然是当今世界面临的一项重要课题。甘氨酸甲基转移酶(GNMT, EC2.1.1.20)是一种在自然界原核和真核生物中都丰富存在的酶,是氨基酸代谢途径中的关键酶,能催化甘氨酸引入甲基转化为肌氨酸,并调控机体内s-腺苷高半胱氨酸和肌氨酸的比率,在生物体内发挥着重要的作用;目前为止,甘氨酸甲基转移酶的晶体结构只有人和鼠的被解析出来,对其他物种的GNMT结构还不了解不足,因此对炭疽杆菌的该酶晶体结构进行研究,能够使我们更全面、更深入的了解该酶的功能和作用机制,为药物设计等应用提供基础。UDP-半乳糖-4-差向异构酶(GalE, EC5.1.3.2)是生命体内另一具重要功能的酶,同样广泛分布于各种各样的生物体内,它是葡萄糖与半乳糖之间转化的枢纽,在半乳糖的代谢中其着至关重要的作用;目前,GalE晶体结构已经通过从人、大肠杆菌、布氏锥虫等物种该酶蛋白组研究中获得,为人类揭开该酶功能和结构机理提供了钥匙,但是,不同的物种因其生存环境不同和自然的选择作用,其GalE结构存在或多或少差异,炭疽杆菌被人类看作一类高致病菌,研究其GalE结构并功能特点,可以使我们更加深入了解其功能发挥原理,为药物之新创和疾病之诊预提供方向。本文根据KEGG (the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) Database中炭疽杆菌GNMT基因序列(登录号为BAS3318)和GalE基因序列(登录号为BAS1093),设计特异引物克隆获得其序列,其序列全长分别为1356bp和846bp,然后通过限制性内切酶双酶切后分别连接到表达载体pET-21a和pET-15b上,经过质粒PCR、双酶切及测序鉴定,筛选出阳性表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达宿主菌成功构建了表达GNMT基因和GalE基因的重组载体工程菌,然后将其在IPTG诱导下进行表达,用镍亲和层析、Mono Q阴离子柱色谱和Sephacryl200(Sephacryl75)分子筛色谱对重组蛋白进行纯化,得到足量的适用于蛋白质结晶研究的融合蛋白,最后进行蛋白的结晶实验和晶体的条件优化筛选,得到了单晶样品,为GNMT高分辨率衍射单晶的获得提供借鉴,为GNMT、GalE晶体结构解析奠定基础。