活化型肝星状细胞中高表达miRNA-193下调Gremlin1及α-SMA表达的研究

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目的:在活化型肝星状细胞(HSC-T6)中高表达miRNA-193(miR-193),研究其对TGF-β1信号通路下游的肝纤维化相关基因(Gremlin1、α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白α1/α2)表达的影响,探讨miR-193与肝星状细胞活化之间的关系。  方法:(1)通过生物信息学软件,筛选出既能与Gremlin1、α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白α1/α2 mRNA3′UTR结合,又能抑制上述4个基因表达的共同miRNA,并分析其结合位点及序列;(2)将筛选出的大鼠miRNA的前体序列(pre-miRNA)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切和DNA测序鉴定后,获得质粒pcDNA3.1-miRNA;(3)通过脂质体转染法,将质粒转染到活化型肝星状细胞(HSC-T6)中,采用免疫印迹检测所筛选的miRNA对Gremlin1、α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白α1/α2表达的影响。  结果:(1)通过在线分析软件PITA成功分析出,既能与Gremlin1、α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白α1/α2 mRNA3′UTR结合,又能抑制上述4个基因表达的miRNA,即miR-193,并结合TargetScan和miRDB分析miR-193与上述4个基因的结合部位及序列;(2)成功构建真核表达载体质粒pcDNA3.1-miR-193,经酶切鉴定及DNA测序正确。(3)免疫印迹检测显示,重组质粒pcDNA3.1-miR-193转染到HSC-T6中后,TGF-β1信号通路下游4个肝纤维化相关基因中,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达明显下降(P<0.05),Gremlin1的表达降低(P<0.05),而其对胶原蛋白Ⅰα1和Ⅰα2的下调作用不明显。  结论:在活化型肝星状细胞中高表达miR-193,能抑制TGF-β1信号通路下游肝纤维化相关基因中Gremlin1及α-SMA的表达,但对胶原蛋白Ⅰα1和Ⅰα2的下调作用不明显。
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