进入21世纪以来,随着社会发展进程的加快竞争日趋激烈,生活、学习、工作等压力也随之不断加大,人们在不同程度上普遍感受到了精神压力,联合国世界卫生组织预测指出,精神病学以及心理卫生将越来越受到人们的重视。据统计在10利,造成社会最沉重负担的疾病中,精神疾病占了4种,精神疾病的总负担占全部疾病负担的1/4,精神医学正在逐步受到医学同行及社会的关注并被赋予新的认识。现在人们对精神健康的关注也从以往的重型精神障碍逐渐向轻型转变。焦虑是精神障碍五大症状群中常见的一种,焦虑障碍作为神经症的一个独立的亚型,其发病率正呈现逐年上升趋势。焦虑障碍又称焦虑症,其主要有两种临床形式--广泛性焦虑障碍和惊恐障碍。广泛性焦虑障碍(generalized anxiety disorder, GAD)又称慢性焦虑症,其主要表现为对实际并不存在的威胁或危险以及身体健康过分的担心、紧张和害怕,并伴有口干、胃肠不适、恶心、腹泻、呼吸困难、心悸、尿频尿急、男性阳痿、女性月经不调、出汗、面色潮红及肌肉紧张、手颤、头痛、坐立不安等症状,另外还伴有注意力不集中、记忆力减退、睡眠障碍等症状。随着我国经济发展和社会文明的进步,人们早已消除了对精神疾病的狭隘误解,正确的认识使得人们对自我心理健康的关注程度有了较大提高,因觉察到自身焦虑症状而主动就医的人数越来越多,焦虑障碍已经成为综合医院门诊、心理咨询和治疗机构中常见的一类疾病。越来越多患有焦虑症状的人群希望能够得到及时、有效的诊断和治疗,为此,全球各国医务工作者正在积极开展对焦虑障碍发病机制以及预防治疗方案等方面的研究。目前,现代医学在对焦虑障碍的发病机制研究方面已经取得了很大进展,药物治疗方面也已具备了较为完善的理论。临床治疗多采用以地西泮为代表的苯二氮卓类药物和丁螺环酮等非苯二氮卓类药物,前者在使用初期起效很快但常伴有嗜睡、便秘、肌松、记忆力减弱等副作用,后者虽副作用较少,但起效通常较慢,另外该类药物由于容易形成依赖和耐受以及戒断反应等因素,故也在一定程度上限制了应用。因此,寻找疗效确切、副作用小的抗焦虑药物就成为了目前抗焦虑研究领域的重要课题。我们的课题研究首先通过收集查阅大量相关文献,在学习借鉴现代医学对焦虑障碍的研究现状之后,找到了焦虑障碍与中医学情志病之间的相关性和共同点,并在总结了中医学历代、各学派学者对情志病的调治方法的基础之上,在博士生导师、知名中医陈宝田教授指导下,确立了清热除焦、调和营卫、安神定志的治疗原则,制定了安神方(ASF)的组方用药。教授结合个人近50年临床经验,在安神方中配伍运用柴胡、酸枣仁、桂枝、龙骨、牡蛎等药物,用于治疗焦虑症见焦躁易怒、胸胁胀闷、惊悸不安、失眠健忘、肢体困乏、口苦咽干、舌红脉弦数的患者。此次研究通过观察安神方治疗广泛性焦虑障碍(GAD)的临床疗效、并进一步通过动物试验探讨安神方治疗焦虑障碍的药效学及相关作用机制。旨在充分发挥祖国医学整体观念、辨证论治这些优势特点的同时,结合现代医学的实验方法,更好的解释其作用效果及机理,为更好的治疗焦虑障碍探索铺就出一条有效之路。一、安神方治疗广泛性焦虑障碍(GAD)的疗效观察1.目的：通过临床观察探讨安神方治疗广泛性焦虑障碍(GAD)的临床效果,观察症侯及临床整体疗效以及收集整理相关检查所得的结果,客观的评价安神方治疗GAD的临床疗效。2.方法：2.1病例与分组：将符合纳入标准的120例GAD入组患者随机分为治疗组和对照组,每组60例；2.2用药：治疗组口服“安神方”(由南方医院中药房提供,方剂组成为：柴胡25g,桂枝10g,黄芩10g,党参15g,白芍15g,生龙骨30g,生牡蛎30g,炒枣仁15g,远志10g,夜交藤30g,甘草10g等),每日1剂,分2次,晨起空腹及晚睡前30min各服一次；对照组口服地西泮(由天津利生制药股份有限公司提供,2.5g/片,100片/瓶)口服,1片/次,晨起空腹及晚睡前30min各服一次。两组均以连续服药4周为1个疗程。治疗期间不同用其他抗焦虑及镇静安眠药。两组均于诊疗中同时注意对患者进行必要的心理疏导,避免情绪波动。2.3改变指标：分别于治疗前及治疗后1、2、4周末各进行一次汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评定。以HAMA减分率(T)作为疗效评定指标, T=(治疗前总分-治疗后总分)/治疗前总分×100%。T小于25%为无效,25%～49%为好转,50%～75%为显著好转,大于75%为临床痊愈；总有效率=(痊愈+显著+好转)/总例数×100%。2.4临床整体疗效、不良反应及安全性判定：以汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和副反应量表(TESS)评价疗效和不良反应及其程度。并于治疗前后检查：体温,心率,血压,呼吸；血、尿、便常规；肝、肾功能；心电图等项目,以此对两组服药后的不良反应以及药物的安全性进行全面的评价。2.5统计学方法：采用统计软件SPSS13.0进行统计学处理和分析。试验数据计量资料采用均数加减标准差(X±S)表示。治疗前后剂量资料比较采用配对样本t检验；两组间计量资料比较采用独立样本t检验；治疗后组间症候疗效比较采用协方差分析；等级资料分布情况采用秩和检验及非参数检验。计数资料以百分率表示,采用卡方检验。所有统计数据均以P<0.05作为有显著性差异的界限。3.结果：治疗4周后,两组HAMA分值均较治疗前有显著差异(P均<0.01),两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组与对照组TESS量表评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。4.结论：初步确认了安神方治疗GAD安全、有效且不良反应较小,值得进一步研究推广。二、安神方抗焦虑作用的药效学研究1.目的：选用大鼠高架十字迷宫试验模型(EPM),观察安神方的抗焦虑作用。2.方法：将60只健康雄性Wistar大鼠随机分为6组(10只/组)：正常对照组、模型组、地西泮组(DZP)和安神方(ASF)高、中、低剂量组。采用慢性情绪应激的方法建立焦虑大鼠模型,同时给予药物干预,以国际公认的高架十字迷宫试验对其进行药效行为学评价。正常对照组不接受任何处理,自由饮水和摄食。其余各组定时喂水训练7天,之后开始应激试验,在上述两个时间段内给予不确定空瓶刺激,维持1天1次或2次,持续2周。在不确定空瓶刺激期间,地西泮组给予1mg/kg灌胃,模型组每天给予等容积生理盐水,ASF高、中、低剂量组每天剂量分别为：40g/kg、20g/kg、10g/kg。于第21天,ASF组末次给药2h、模型组及DZP组末次给药0.5h后,进行高架十字迷宫行为学测定,大鼠均提前2h进入测试实验室适应环境。3.仪器：大鼠高架十字迷宫(EPM)采用国际通用的方法制作。4.统计学方法：试验数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用SNK法。试验数据均以均数加减标准差(x±s)表示,P<0.05为有统计学意义。5.结果：与正常对照组比较,模型组大鼠进入开臂的时间百分率(OT%)次数百分率(OE%)均明显减少；DZP组与ASF高、中、低剂量组大鼠进入开臂的时间百分率(OT%)、次数百分率(OE%)均较模型组显著上升,其中以ASF中剂量组上升最明显。6.结论：行为学试验结果显示：DZP组、ASF高、中、低剂量组同模型组比较, EPM中大鼠OE%和OT%值均升高(P<0.05),尤其是ASF中剂量组升高最明显(P<0.01),其作用效果与DZP相当,这进一步证实了ASF对大鼠焦虑状态的干预作用,而且以中剂量给药干预效果最好。三、安神方抗焦虑作用的形态学及相关机制研究1.目的：观察安神方(ASF)的抗焦虑作用,并初步研究其机制。2.方法：①.将所取雄性Wistar大鼠随机平均分为6组：正常对照组、模型组、DZP组和ASF高、中、低剂量组；②.采用慢性情绪应激的方法建立焦虑大鼠模型,同时给予药物干预,以国际公认的高架十字迷宫模型(EPM)试验对其行为学进行评价；③.行为学观察后,将正常对照组、模型组、DZP组及ASF高、中、低剂量组大鼠立即麻醉处死、断头,于冰台上剥离大鼠的海马组织。④.在光学显微镜下采用HE染色法观察大鼠脑组织内神经元形态结构的改变和胶质细胞的增生情况；用尼氏染色法观察神经元受损和尼氏体的丢失情况。⑤.用免疫组化法观察ASF对焦虑大鼠脑组织内氨基酸类神经递质--Y-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)含量的影响；⑥.用Western bolt法观察ASF对焦虑大鼠脑组织内氨基酸类神经递质受体-GABAA受体(GABAARα1)和Glu受体(N-甲基-D-天冬氨酸受体1即NMDAR1)表达的影响；⑦.用荧光定量PCR法观察ASF对焦虑大鼠脑组织内氨基酸类神经递质受体-GABAA受体(GABAARα1)和Glu受体(N-甲基-D-天冬氨酸受体1即NMDAR1)基因表达的影响。3.仪器：MilliQS纯水／超纯水系统、6219型PH计、BCD-196DT冰箱、CR703恒温振荡器、SFG-02B电热恒温干燥箱、TS-1脱色摇床、Eoipse Ti-s倒置显微镜、MI-22FOEGC微波炉、RF2000荧光检测器、PHS-2C精密酸度计、Avanti30冷冻离心机、BA110S电子天平、TiThermocyclerRea-timepCR仪、CA-92-2垂直层流洁净工作台、DYCP水平电泳槽、DYY6B型稳压稳流电泳仪、sigma3K30超速冷冻离心机、MX3005P荧光定量PCR仪及分析软件MXPro4.014.试剂：PBS缓冲液(ph7.2—7.4)、高效切片石蜡、中性甲醛、无水酒精、二甲苯、浓盐酸、苏木精、伊红染、中性树脂、50ml离心管、普通玻片、盖玻片、玻片盒、玻片架、谷氨酸(Glu)购自美国SIGMA,公司批号分别为43907190；Y-氨基丁酸(GABA)购自美国SIGMA公司,公司批号116K5005；乙腈购自美国TEDIA公司；GABAARal兔IgG多克隆抗体购自美国santa curz公司；N-甲基-D-天冬氨酸受体KNMDAR1)兔IgG多克隆抗体购自美国santa curz公司;2mlPCR荧光管购自Axgen公司；Nalater:AMBION公司；2000bpDNALadder:广州瑞真生物科技有限公司；焦碳酸二乙醋(DEPC) treated water:大连TaKaRa宝生物公司；Trizol:Invitrogen公司、RNA反转录试剂盒：Takara公司、SyBrI荧光定量试剂盒购自Gene copoeia公司、琼脂糖购自Sigma公司,其余试剂均为进口及国产分装试剂。5.统计学方法：试验数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用SNK法。试验数据均以均数加减标准差(x±s)表示,以P<0.05为有统计学意义。6.结果：①.正常对照组：海马CA3区细胞排列整齐,细胞核圆而大,核仁清晰可见,锥体细胞排列整齐,层次紧密,尼氏体深染；模型组：海马CA3区锥体细胞排列紊乱,神经细胞出现明显的病理变化,染色质溶解,部分细胞脱失,胞体固缩呈多角形或不规则形,胞质浓缩核膜界限不清,锥体细胞排列松散,细胞缺失,尼氏体浅染甚至溶解；DZP组：海马CA3区锥体细胞排列比较整齐,少部分神经细胞出现病理变化,少部分细胞染色质溶解,少部分胞体固缩呈不规则形,锥体细胞排列部分松散,锥体细胞与中剂量组相当,细胞部分缺失；ASF低、中、高剂量组：海马CA3区锥体细胞排列比较整齐,神经细胞部分出现病理变化,部分细胞染色质溶解,部分细胞脱失,胞体固缩呈不规则形。其中中剂量组细胞形态修复最好,ASF低剂量组锥体细胞排列比较整齐,比模型组锥体细胞明显增多,细胞部分缺失,尼氏体浅染；ASF中剂量组锥体细胞排列比较整齐,锥体细胞与高剂量组相当,细胞部分缺失,尼氏体染色较高剂量组深染,与DZP剂量组相当；ASF高剂量组锥体细胞排列比较整齐,比低剂量锥体细胞有所增多,细胞部分缺失,尼氏体浅染。②.模型组大鼠海马组织中Glu的表达量较正常对照组显著上升,GABA的表达量明显下降;地西泮组和安神方中剂量组同模型组比较,大鼠海马组织中Glu的表达量显著降低和GABA的表达量明显提高,安神方中剂量组与地西泮组比较差异不显著；③.模型组与正常对照组比较,GABAA受体表达减少,Glu受体表达增多；地西泮组和安神方高、中、低剂量组分别同模型组进行比较,Glu受体的表达水平均降低,GABAA受体的表达水平均提高；安神方中剂量组与地西泮组比较无明显差异。④.模型组与正常对照组比较,GABAA受体基因减少,Glu受体基因增多；地西泮组和安神方高、中、低剂量组分别同模型组进行比较,Glu受体基因水平均降低,GABAA受体受体基因水平均提高；安神方中剂量组与地西泮组比较无明显差异。7.结论：安神方具有抗焦虑的作用,具体表现在：①可以修复焦虑模型大鼠中枢神经系统中海马区出现的病理性变化；②可以提高大鼠中枢神经系统中GABA的含量,降低Glu的含量；③可以增加大鼠中枢神经系统中GABA受体的表达,减少Glu受体的表达；④可以增加大鼠中枢神经系统中GABA受体基因的表达,减少Glu受体基因的表达。以上研究结果进一步证实了安神方对大鼠焦虑状态的干预作用,而且以中剂量给药干预效果最好。