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目的：构建SEPT9基因真核表达载体转染惰性转移潜能人肝癌细胞株HepG2，研究SEPT9基因过表达对HepG2细胞增殖、迁移以及侵袭转移的影响，探讨SEPT9在肝癌发生发展中的作用，为SEPT9成为肝癌侵袭转移新的生物学指标及基因治疗靶点提供更充分的依据。方法：常规培养人肝癌HepG2细胞，待细胞生长状态良好并达到指数生长期时接种于6孔板，接种后24h内将SEPT9基因真核表达载体pIRES2/EGFP-SEPT9转染HepG2细胞。设过表达组（转染重组质粒pIRES2/EGFP-SEPT9）、空质粒组（转染空质粒pIRES2/EGFP）和空白组（不加任何特殊试剂正常培养）。各孔HepG2细胞中加入脂质体LipofectamineTM200010μl+DNA4μg混合物进行转染。①转染后48h，荧光显微镜下观察带有EGFP的细胞所占比例，判断转染效率。②转染后72h，细胞裂解法提取各组细胞总蛋白，BCA法测定蛋白浓度，SDS-PAGE电泳，半干法转膜，脱脂奶粉封闭，一抗、二抗杂交孵育，化学发光液显影，紫外凝胶成像分析系统自动曝光，凝胶成像仪扫描Image J2X软件分析，检测各组细胞中SEPT9蛋白相对于内参蛋白GAPDH的表达量。③以转染后0h、24h、48h、72h为时间点，CCK-8法检测SEPT9基因过表达对细胞生长增殖的影响。④转染后0h、24h、48h、72h细胞划痕实验检测各组HepG2细胞迁移运动能力变化。⑤转染后48h Transwell实验检测各组HepG2细胞侵袭性及转移性。结果：①转染后48h，绿色荧光细胞所占比率判断出转染效率约达70%。②western blot法分析显示：过表达组SEPT9蛋白条带亮度明显强于两对照组。定量分析显示，空白组、空质粒组、过表达组SEPT9蛋白的相对表达量分别为0.7078±0.018、0.7136±0.012、1.0526±0.020。经SNK-q检验方差分析，过表达组SEPT9蛋白相对表达量分别与两对照组相比，约上升了48%左右，差异有统计学意义（P<0.05）。③CCK-8法结果显示：与两对照组比较，过表达组HepG2细胞在转染后24～72h内增殖速度增快，48h达到21.726%，72h达到30.164%，差异有统计学意义（P＜0.05）。④细胞划痕实验结果，24～72h过表达组划痕宽度变化快，相比两对照组，划痕出现了明显愈合趋势。软件测量并计算各时间段迁移距离，过表达组细胞迁移距离与两对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。⑤侵袭实验和迁移实验结果均显示过表达组穿过Transwell小室的细胞数较两对照组明显增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：①构建的SEPT9基因真核表达载体pIRES2/EGFP-SEPT9可使惰性转移潜能肝癌细胞株HepG2中SEPT9蛋白表达量增加。②过表达SEPT9基因能显著促进HepG2细胞增殖。③过表达SEPT9基因能增强HepG2细胞迁移、侵袭转移能力。