目的:铅作为广泛分布于环境中的有毒金属,与钙同为二价金属,被认为模拟或干扰了钙依赖性生化过程并引起机体以神经系统为主的多系统损害。实验室前期基础表明,铅能够通过Ry Rs引起海马神经元内静息钙离子浓度增加。那么,铅是否直接对Ry Rs通道开放有作用,如何作用,不得而知。为此,本研究将通过受体配体结合检测铅对大脑内质网[3H]ryanodine结合的影响,进而研究铅对Ry Rs通道开放功能的影响。方法:(1)成年大鼠麻醉后直接断头取出大脑并运用裂解液进行匀浆。(2)采用密度梯度超高速离心法提取大鼠大脑内质网并通过透射电子显微镜和蛋白印迹(Western Blotting)对内质网的提取效果和成分进行鉴定。(3)放射性受体配体结合实验研究:A.铅对大脑内质网[3H]ryanodine结合影响,包括剂量反应关系和时间反应关系;B.铅和钙的相互作用对[3H]ryanodine结合的影响;C.铅和Ry Rs其他调节剂的相互作用对[3H]ryanodine结合的影响。结果:(1)提取的内质网中同时含有粗面内质网和滑面内质网并均表达Ry R2、Ry R3和内质网标记蛋白GRP78。(2)[Pb2+]f在0~100μM范围内时,铅离子呈“V”型抑制了[3H]ryanodine结合。(3)0.39μM铅离子的存在使钙依赖的[3H]ryanodine结合水平总体被抑制,但铅对钙浓度依赖曲线的抑制作用不具有浓度依赖性;钙离子浓度的存在使铅的抑制所用更明显。(4)铅的存在不同程度地影响或改变了调节剂如PKA、DTT和Mg2+对Ry Rs的作用。结论:大脑内质网放射性受体配体结合实验证明,铅可能通过作用于Ry Rs上多个作用位点而“V”型抑制[3H]ryanodine结合。