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背景急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)在我国乃至全球范围内都是高发病率的严重心血管疾病,也是心源性猝死的主要原因,病死率长期居高不下。如何有效地预防缺血性心脏病的发生,降低缺血性心脏病损伤程度,一直是心脏康复领域的研究热点。近年来,电针预处理是针灸“治未病”思想在现代医学模式下的治疗手段之一,针刺内关穴可通过外周神经系统和中枢神经系统抗心肌缺血损伤,然而电针“内关穴”预处理对心肌缺血的具体分子机制尚未明确。目的本研究的目的是为了探讨电针“内关穴”预处理对大鼠急性心肌梗死损伤后心脏形态学和功能恢复的影响以及潜在的分子作用机制。方法第一章研究中,我们将SD大鼠随机分为3组:第1组,假手术组(Sham组,只穿线,不做其他处理);第2组,AMI模型组(M组,手术永久性结扎大鼠冠脉左前降支,无任何其他治疗);第3组,电针预处理组(EA+M组),每组10只。EA+M组大鼠从造模前7天开始给予电针刺激双侧前肢内侧内关穴,皮下刺入深度2-3 mm。疏密波,刺激电流为4-6 mA,输出电压为2-4 V。每日针刺一次,一次30 min,连续7天。实验动物建模成功后,采用经胸超声心动图检查,比较3组大鼠的心脏结构和功能学指标变化。随后麻醉处死大鼠,采集血清和心脏样本。ELISA试剂盒用于比较不同处理组大鼠的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;HE染色和TTC染色分别用于观察心梗后心肌组织病理损伤和梗死面积。第二章研究中,SD大鼠分组及处理方法同第一章研究。TUNEL染色用于检测心肌细胞凋亡水平,透射电镜观察心肌细胞的超微结构及自噬体的形成,并通过Western blot半定量分析自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1和P62的表达水平。第三章研究中,我们使用Compound C抑制AMPK信号,并将SD大鼠随机分为Sham组、M组、EA+M组、AMPK介导的抑制剂化合物Compound C组(M+EA+CC组)和AMPK抑制剂溶剂二甲基亚砜对照(M+EA+DMSO组)。采用ELISA试剂盒检测不同处理组的大鼠的血清CK-MB和LDH水平,HE染色和TTC染色分别用于观察心肌组织病理损伤和梗死面积,透射电镜观察心肌细胞超微结构及自噬体的形成,免疫组化和Western blot用于分析自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bcl-2、P62及AMPK信号通路p-AMPK/t-AMPK、p-mTOR/t-mTOR的表达。结果电针“内关穴”预处理对急性心肌梗死大鼠具有较好的保护作用,电针可以改善急性心肌梗死大鼠的心脏结构和功能,减轻心肌病损;电针“内关穴”预处理还可以显著降低急性心肌梗死大鼠的血清CK-MB和LDH的浓度。深入的研究发现,电针“内关穴”预处理能抑制心肌细胞凋亡,促进心肌细胞内自噬体的形成和自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达,同时抑制Bcl-2和P62的蛋白表达。分子机制研究结果显示,电针“内关穴”预处理可以诱导心肌组织p-AMPK蛋白表达上调,同时促进p-mTOR蛋白低表达。然而,AMPK抑制剂化合物Compound C可以抵抗电针预处理对AMPK介导的自噬相关蛋白表达的影响,抑制AMPK依赖的自噬体形成,从而抵抗电针“内关穴”预处理对急性心肌梗死大鼠的保护作用。结论电针“内关穴”预处理可能通过诱导AMPK依赖的自噬体形成,抑制心肌细胞凋亡,减轻心肌病损和梗死面积,恢复心脏结构和功能,从而实现预防和保护大鼠急性心肌梗死损伤模型的目的。