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在我国,苦瓜藤来源丰富、药用价值较高。苦瓜藤多糖(MVP)是苦瓜藤的主要功效成分之一,研究苦瓜藤多糖的分离纯化工艺及其理化性质和单糖组成,对苦瓜藤的开发利用具有重要意义。本文研究了苦瓜藤多糖的分离纯化工艺,测定分析苦瓜藤多糖的理化性质和单糖组成,研究结果和结论如下:苦瓜藤经过干燥粉碎处理后,超声波辅助水提取或普通热水提取,得到苦瓜藤粗多糖水溶液,采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量,并进一步计算粗多糖提取率。通过单因素和正交实验优化其两种提取工艺的参数,比较两种最佳工艺的多糖提取率。结果表明,超声波辅助提取时,影响多糖得率的主次因素为:温度>超声时间>pH>料液比,经过L9(34)正交实验优化得到的苦瓜藤多糖的最优提取参数为:提取温度65±2℃、料液比1:25(g/mL)、超声时间35min、pH为7,提取两次,多糖得率可达到3.08%;普通热水提取时,影响大小为:料液比>浸提温度>浸提时间,经过L9(33)正交实验优化得到的苦瓜藤多糖的最优提取参数为:提取温度75±2℃、料液比1:55(g/mL)、提取时间90min,浸提2次。与普通水提法相比,超声一次提取效率约为水提法的2.5倍。醇沉粗多糖加水复溶后,采用Sevag试剂和LSA-10树脂对其进行脱蛋白处理。采用苯酚-硫酸法测定处理前后的多糖液多糖含量,计算其多糖损失率;采用考马斯亮蓝法测定处理前后的多糖液蛋白质含量,计算其脱蛋白效率。最后对两种方法除蛋白质后的糖液进行紫外光谱扫描,鉴定其脱蛋白效果,综合比较两种脱蛋白工艺。结果得出,Sevag法去除蛋白质不完全,5次处理后,蛋白的总脱除率为55.99%,苦瓜藤多糖的损失率为48.81%;LSA-10的除蛋白率为83%,同时苦瓜藤多糖的损失率为3.02%,相较Sevag法脱蛋白,除蛋白质率高,而且多糖损失率较低。可见,LSA-10大孔树脂对于游离蛋白和糖蛋白缀合物的吸附具有良好的选择性,比较适合MVP脱蛋白。在对两种方法去蛋白质后的糖液进行紫外光谱扫描发现,两种方法处理后都还存在极弱的蛋白质吸收。采用大孔树脂吸附法对脱蛋白多糖进行脱色处理,研究五种树脂DA-201、 LSA-10、D-101、AB-8、XDA-6静态吸附色素和多糖的能力,采用紫外分光法测定色素含量,苯酚-硫酸法测定多糖含量,并通过综合评价机制选出除色素的最优树脂,应用动态吸附法除去多糖液色素。结果表明,LSA-10的F值最大,可作为除色素的最优树脂。通过LSA-10动态脱色的研究,发现LSA-10树脂除色素能力为77.85%。在苦瓜藤多糖的纯化分离研究中,应用DEAE-52Cellulose、Sephadex G-200柱层析分离纯化苦瓜藤多糖。在DEAE-52Cellulose柱层析时,先用蒸馏水洗脱再用0.15mol/L、0.3mol/L氯化钠溶液等度洗脱,苯酚-硫酸法跟踪检测;分离得到的组份再经Sephadex G-200柱层析纯化以确保得到纯品。结果表明,苦瓜藤多糖在0.15mol/L的氯化钠浓度下便可以被全部洗脱出柱,得到两个主要的多糖组分中性多糖MVP-1和酸性多糖MVP-2;两种多糖组分经Sep dex G-200柱层析进一步纯化,初步判断MVP-1和MVP-2均为比较单一的多糖,这表明DEAE-52纤维素分离纯化效果佳。采用蒽酮-硫酸法、硫酸-咔唑法、考马斯亮蓝法、碘-碘化钾法等颜色反应分析苦瓜藤多糖的理化性质,采用气相色谱、分子表征系统及红外光谱分别分析苦瓜藤多糖的单糖组成、分子量和结构。结果得出,MVP-1和MVP-2均为无结合蛋白质的非淀粉均一多糖;MVP-1和MVP-2的单糖组成成份相似,至少由五种单糖组成,分别是:鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,MVP-1的单糖组成大致比例为:Gal:Man:Glu:Rha:Ara=1:0.92:0.54:0.43:0.21; MVP-2的单糖组成大致比例为:Gal:Man:Glu:Ara:Rha=1:0.71:0.63:0.32:0.27; BI-MwA/BI-DNDC绝对分子量表征系统测得MVP-1的Mw为42230道尔顿(Da), MVP-2的Mw为24460道尔顿(Da)。红外分析结果表明苦瓜藤多糖具有典型的多糖吸收峰。