根据测序结果,设计鼠源性单抗重轻链可变特异性引物,从该室已构建的抗转铁蛋白受体(TFR)单克隆抗体VH、VL克隆载体上扩增VH、VL基因,利用SOE法构建其单链抗体VH-Linker-VL,经Sfi I和Not I双酶切,连至表达载体pUC19/119上,经转化大肠杆菌TGl,通过菌落PCR筛选阳性克隆,采用荧光染色链终止法测定scFv序列,从Internet网上下载DNA分析工具与其来源基因进行分析比较,发现基本吻合,同时Linker序列为GGGGSGGGGSSGGGS,提示 单链抗体基因构建成功.阳性菌落用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE蛋白电泳,在约26kD处可见条带,采用间接免疫荧光抑制试验和间接免疫荧光试验,证实此单链抗体可特异性与TFR+细胞结合.利用Internet网上日内瓦生物攻学研究所开发的ExPASy分子生物学服务器,对scFv基因的氨基酸序列进行分析,包括理化特性分析、氨基酸组成和分子量分析、序列统计学分析等.同时,利用蛋白质结构同源性模建(Swiss-Model)系统做了VH-Linker-VL、VL-Linker-VH、VH-VL、VL-VH的蛋白质分子3D模建.利用英国Bath大学开发的WAM服务系统,对其来源抗体进行模建.使用Spdbv软件对上述各模型结构进行比较,发现抗TFR单抗VH、VL在此单链抗体中的顺序对对单链抗体的结构有结构有所影响.该研究采用的分子生物学技术及利用Internet上的服务系统、在线数据库和共享软件等网络工具,为单链抗体的构建及其理论分析提供了新的手段,为进一步分析重轻链在抗体中的作用和改造抗体提供了新的思路.开拓了Internet应用在免疫学研究中的新疆界.