含EGFR基因19号外显子和21号外显子重组质粒的构建及应用

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hulisheng
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目的:  构建检测EGFR基因突变所用的质控品和标准品。  方法:  从健康人淋巴细胞基因组克隆,设计四对引物引入突变位点,RNA反转录cDNA,采用普通PCR的方法,扩增野生型EGFR基因外显子19片段和含缺失突变(del E746-A750)的EGFR基因外显子19片段,野生型EGFR基因外显子21和含点突变(L858R)的EGFR基因外显子21片段,并分别克隆至载体pEGFP-C1中,构建含EGFR基因外显子19和外显子21的重组质粒,用于检测EGFR基因突变的质控品和标准品。  结果:  构建出含EGFR基因外显子19和外显子21的重组质粒,野生型重组质粒命名为 pEGFP-C1-EGFR-19和 pEGFP-C1-EGFR-21,突变型重组质粒命名为pEGFP-C1-EGFR-19(del E746-A750)和pEGFP-C1-EGFR-21(L858R),通过酶切和测序鉴定证明构建成功,浓度、纯度、稳定性达到质控品和标准品的要求。  结论:  成功构建了阳性和阴性对照质粒,为后续构建检测EGFR基因突变的方法使用。
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