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圆环病毒病是由圆环病毒感染所引起的器官功能性障碍或繁殖障碍疾病,该病是世界范围内公认的严重危害养猪业的主要疾病之一,当与其他病毒混合感染时往往对猪造成严重的危害。为了解PCV2在河北省流行特点及遗传演化规律,本研究建立PCV2和PCV3双重纳米PCR检测方法,对河北省养猪场的379份临床样品进行PCV2和PCV3检测,并对47阳性样品进行了PCV2 ORF2基因测序分析,部分PCV2和PCV3全基因序列分析,结果如下:1.应用PCR方法对379份临床样品进行检测。结果发现PCV2的阳性感染率达到53.6%,PCV3的阳性感染率较低为25.6%,而PCV2和PCV3混合感染率为12.1%,表明我省北部地区PCV2和PCV3感染较普遍。47个强阳性样品的PCV2 ORF2基因遗传演化分析,结果发现2015~2019年间河北省PCV2优势流行毒株为PCV2b和PCV2d亚型,但亦存在少数PCV2e的流行。2.应用PCR检测方法对2株PCV2(HB-PCV2-5、HB-PCV2-182)和1株PCV3(HB-PCV3)阳性毒株的全基因进行扩增、克隆、测序和遗传进化分析。结果显示,QHD1-PCV2-5属于PCV2e,QHD2-PCV2-182属于PCV2d,与参考毒株间同源性为93.3%-99.6%;与2010年后分离的毒株同源性高,亲缘关系近,提交至GenBank的登陆号为MT711855和MT711856。QHD-PCV3属于PCV3b亚型,GenBank的登陆号为MT71187。3.参照GenBank上PCV2和PCV3的完整序列,用Premier 5.0软件设计了两对特异性圆环病毒检测引物,分别为PCV2-F/R,PCV3-F/R,通过基因扩增等方法将阳性组织样品DNA制作成重组质粒pMD-PCV2和pMD-PCV3,以重组质粒为模板,对引物用量和退火温度进行摸索优化。结果显示,重组质粒pMD-PCV2和pMD-PCV3双重纳米PCR方法在温度为54.5℃,引物用量为1.0μL时,扩增效率最高。敏感性试验表明纳米PCR方法的灵敏度是普通PCR的100倍,其中质粒pMD-PCV2和pMD-PCV3的最低模板检出量为1.2×10~3copies/μL,特异性试验表明病毒核酸之间不存在交叉反应。