目的 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是广泛存在于生物界(从原核生物到真核生物)中具有高度保守性质的蛋白质。大量的研究表明HSP70在包括肝癌在内的大多数的肿瘤中均有高表达。目前的研究表明,HSP70在许多肿瘤细胞中过度表达,不仅对肿瘤细胞的保护、维持细胞的稳定有重要的作用,而且在抑制肿瘤细胞调亡的过程中也发挥着重要的作用。同时也发现,源自肿瘤组织的HSP—肿瘤肽免疫宿主可激发持久的T细胞免疫,产生特异的抗肿瘤免疫效应。本试验的研究目的就是应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中建立分离和纯化HSP70—肿瘤肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG—2增殖的影响和其对HepG—2中JNK和c—Jun表达的影响。 方法 1.总蛋白的制备:应用裂解液进行匀浆,并高速离心。 2.HSP70—肿瘤肽复合物的纯化:上述的总蛋白依次进行ConA—Sepharose亲和层析和DEAE—Sephacel离子交换层析分离纯化。 3.HSP70—肿瘤肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白浓度。 4.利用MTT方法检测HSP70—肿瘤肽复合物对HepG—2细胞增长的情况。 5.应用Western—blot的方法检测JNK,p—JNK,c—Jun,p—c—Jun表达的情况。